Agilent Nanospray/Nanodapter - Quick Start Guide

Význam tématu

Analýza při nanolitrových průtocích hraje v proteomice, farmaceutickém výzkumu a biochemii klíčovou roli pro dosažení maximální citlivosti a rozlišení. Použití Nanospray ionizačního zdroje ve spojení s adaptérem Nanodapter umožňuje spolehlivou a opakovatelnou dodávku vzorku v rozsahu stovek nanolitrů za minutu. Díky nízké spotřebě rozpouštědel a vynikajícímu poměru signál/šum se zvyšuje selektivita a kvalita získaných dat, což odstraňuje překážky v analýze vzácných nebo nízkopolymerních látek.

Cíle a přehled příručky

Rychlý průvodce se zaměřuje na instalaci, konfiguraci a úvodní ověření provozuschopnosti systému Agilent Nanospray/Nanodapter. Krok za krokem popisuje: nastavení LC modulu, montáž Ultra-Low Dispersion jehlového sedla, instalaci Nanodapteru na LC, instalaci ionizační jehly, přípravu softwaru a kontrolu průtoku. Součástí je také postup pro kontrolu stability spraye, přípravu HSA peptidového standardu a vyhodnocení výkonu LC/MS při nanoprůtocích.

Použitá metodika a instrumentace

Systémová instrumentace:

• Kapalinové chromatografy Agilent 1290 Infinity II nebo 1290 Infinity s modulární autosamplerem
• Nanospray ion source s adaptérem Nanodapter
• Sensirion Liquid Flow Sensor s USB-RS485 rozhraním a softwarem Flow Viewer
• Q-TOF LC/MS pro detekci a vyhodnocení iontů
• Software MassHunter Qualitative Analysis pro extrakci EIC a integraci dat

Metodika zahrnuje konfiguraci přímého nano-průtoku i průtoku s pastí, přípravu standardního roztoku peptidů (20 fmol/µl HSA), optimalizaci jehlového napětí (900–1500 V), nastavení polohy jehly a kontroly stability signálu.

Hlavní výsledky a diskuse

Po instalaci a kalibraci systému nastavení průtoku 300 nL/min stabilně vygenerovalo kapku na konci jehly a kvalitní spray při 1250–1300 V. Extrakce iontových chromatogramů sedmi peptidů HSA potvrdila vysokou reprodukovatelnost (FWHM < 0,25 min; SD retenční doby < 1 %) a dostatečnou intenzitu signálu pro citlivou analýzu. Ukázalo se, že umístění jehly (vertikálně ~12 mm, horizontálně ~3 mm od spray cap) a údržba nízkých úrovní pozadí v systému zásadně ovlivňují kvalitu dat.

Přínosy a praktické využití metody

Díky Nanodapteru lze snadno přepínat mezi přímou injekcí a separací s pastí nebo diverterem, což zjednodušuje čištění vzorku a redukci carry-over. Nízkou provozní hmotností a malým objemem mrtvého prostoru systém umožňuje dlouhodobou stabilitu spraye, výbornou citlivost a opakovatelnost výsledků. Automatizované nastavení polohy jehly a sofistikovaný software pro sledování průtoku usnadňují rutinní provoz v QA/QC i výzkumných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrace nanoionizačních zdrojů se senzory průtoku do cloudových monitorovacích systémů otevře cestu k prediktivní údržbě a dálkovému řízení. Další vývoj bude směřovat k miniaturizaci, vyšší propustnosti paralelních nano-kanálů a kombinaci s novými režimy ionizace pro multiomics analýzy. Rozšíření adaptérů a modulů pro mikrofluidní předúpravu vzorku posílí automatizaci a zkrátí dobu přípravy.

Závěr

Agilent Nanospray s Nanodapter adaptérem představuje robustní řešení pro nanolitrové průtoky v LC/MS. Postupy rychlého uvedení do provozu a validace performance, včetně přípravy peptidových standardů a kontroly stability signálu, poskytují uživatelům jasný rámec pro dosažení vysoké citlivosti a opakovatelnosti. Dodržení doporučených kroků instalace, nastavení jehly a údržby průtoku zaručuje dlouhodobou spolehlivost a minimální provozní náklady.