Direct infusion of an analyte with an ISQ EC or ISQ EM single quadrupole mass detector

Význam tématu

Přímá infuze vzorku do hmotnostního spektrometru představuje efektivní cestu k rychlému ladění zdrojových parametrů a kalibraci na jednočtvercovém detektoru ISQ EC/EM. Umožňuje okamžité posouzení citlivosti a stability signálu bez časově náročné separace.

Cíle a přehled studie / článku

Popis nastavení a provozu externího stříkačkového čerpadla pro přímou infuzi nebo infuzi do elučního proudu. Ukázková data s myoglobinem demonstrují možnosti rychlé optimalizace metod v Chromeleon CDS.

Použitá metodika a instrumentace

Pro infuzi bylo využito následujícího vybavení:

• Hmotnostní detektor: Thermo Scientific ISQ EC nebo ISQ EM s HESI zdrojem
• Stříkačkové čerpadlo: Chemyx Fusion 100-X
• Stříkačky: Hamilton 1700 Series Gastight (500 µL) a odnímatelné jehly
• Kapiláry a konektory: PEEK tubus, Teflon FEP, PEEK unie, PEEK tee-prvek a fittingy
• HPLC systém připojený pro infuzi do elučního proudu
• Software: Thermo Scientific Chromeleon CDS pro řízení zdroje a Biopharma Finder pro dekonvoluci

Hlavní výsledky a diskuse

Modelový protein myoglobin byl infundován přímou cestou při 10 µL/min, což umožnilo jasné zobrazení nabitých stavů (z = 10–26) a detekci volné heme skupiny. Při infuzi do elučního proudu (HPLC 400 µL/min + čerpadlo 10 µL/min) byla zaznamenána pouze apomyoglobinová forma v důsledku ředění. Stabilní signál vyžaduje dostatečnou dobu pro vypláchnutí vedení a odstranění vzduchových bublin ve stříkačce.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Rychlou optimalizaci zdrojových parametrů bez oddělovací kolony
• Možnost ověřit vliv eluční složení a průtokové rychlosti
• Uplatnění v rutině QA/QC a při vývoji nových hmotnostních metod

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry rozvoje:

• Plně automatizované optimalizační sekvence v Chromeleon CDS
• Rozšíření aplikace na větší biomolekuly a komplexní směsi
• Integrace nanofluidických toků a miniaturizovaných infuzních zařízení

Závěr

Popisovaná konfigurace stříkačkového čerpadla s ISQ EC/EM je jednoduchým a flexibilním nástrojem pro rychlé nastavení a optimalizaci hmotnostně spektrometrických metod bez potřeby chromatografické separace.

Reference

• 1. Thermo Scientific Technical Note 73669: The benefits of adding single quadrupole mass detection to liquid chromatography. Thermo Fisher Scientific
• 2. Thermo Scientific Technical Note 73670: Quality control of oligonucleotides with a single quadrupole mass spectrometer. Thermo Fisher Scientific