Quantitative Analysis of Mycophenolic Acid and Metabolites in Serum Using a Single Quadrupole Mass Spectrometer

Význam tématu

Koncentrace mykofenolové kyseliny a jejího glukuronidu v séru jsou klíčové pro terapeutické monitorování imunosupresivní léčby. Tradiční imunotesty často vykazují interferenční chyby a variabilitu reaktivních protilátek. Kombinace kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie nabízí vysokou selektivitu, citlivost a rychlost analýzy.

Cíle a přehled studie

Studie demonstruje kvantifikaci mykofenolové kyseliny (MPA) a jejího β-D-glukuronidu (MPA-G) v plasmě pomocí kompaktního jednovazebného hmotnostního spektrometru Shimadzu LCMS-2050 spojeného s UHPLC Nexera X3. Hlavním cílem bylo dosáhnout spolehlivé analýzy do 2 minut na vzorek se zachováním linearity a přesnosti.

Použitá instrumentace

• UHPLC Nexera X3
• Single quadrupole hmotnostní spektrometr LCMS-2050 se zdrojem DUIS (kombinovaná ESI/APCI ionizace)
• DOSIMYCO trapovací a analytická kolona

Použitá metodika

Pro přípravu vzorků byl použit komerční kit DOSIMYCO s přídavkem kalibrátorů a kontrol obsahujících izotopově značené interní standardy ([13C,2H3]-MPA a [13C,2H3]-MPA-G). Po přidání interního standardu a extraktu do plazmy následovalo promíchání (vortex), centrifugace a přenos supernatantu do autosampleru. Analýza probíhá v režimu SIM, mobilní fáze A/B při průtoku 0,8 mL/min, teplota kolony 65 °C a objem injekce 10 μL.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky pro MPA (0,1–50 mg/L) a MPA-G (1–250 mg/L) prokázaly výbornou linearitu (R2 ≥ 0,999). Přesnost výsledků se pohybovala v rozmezí 90–110 % a relativní odchylka (RSD) byla pod 5 %. Kontrolní vzorky potvrdily robustnost metody s %RSD maximálně 4 %. Chromatogramy ukázaly ostré píků v čase do 2 minut.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlý čas analýzy (2 minuty na vzorek)
• Vysoká selektivita a citlivost
• Jednoduchá obsluha vhodná pro začínající uživatele MS
• Nákladově efektivní alternativa k trojkvadrupólovým systémům
• Vhodné pro klinická i rutinní laboratorní prostředí

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metod na další imunosupresiva a jejich metabolity, automatizace přípravy vzorků a integrace do vysoce propustných klinických platforem. Dále se předpokládá další miniaturizace přístrojů a kombinace s pokročilými detektory pro širší spektrum analytických aplikací.

Závěr

Metoda založená na jednovazebné hmotnostní spektrometrii LCMS-2050 v kombinaci s UHPLC Nexera X3 poskytuje spolehlivý, rychlý a citlivý nástroj pro kvantifikaci mykofenolové kyseliny a jejího glukuronidu v plasmatických vzorcích. Splňuje požadavky klinického monitorování a nabízí ekonomicky výhodnou volbu pro rutinní analytiku.