Integration of mycophenolic acid and its metabolite analysis in plasma using LC-MS/MS with full-automated sample preparation

Význam tématu

Monitorování mykofenolové kyseliny (MPA) a jejího glukuronidu (MPA-G) je klíčové pro terapeutické sledování pacientů po transplantacích a pro farmakokinetický výzkum. Přesná a rychlá analýza těchto látek v plazmě pomáhá optimalizovat dávkování a minimalizovat nežádoucí účinky.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo integrovat automatizovanou přípravu vzorků s vysoce citlivou LC-MS/MS metodikou pro simultánní stanovení MPA a MPA-G v lidské plazmě. Studie porovnává tradiční ruční extrakci se systémem CLAM-2000 pro zvýšení průchodnosti a reprodukovatelnosti.

Použitá metodika

Vzorky plazmy byly zpracovávány v automatizovaném systému CLAM-2000 pomocí precipitace metanolem, následné filtrace a přímého přenosu na LC-MS/MS. Chromatografická separace proběhla na trap C8 kolonce a analytické C18 kolonce při 65 °C, isokratický tok zajišťoval dobu analýzy 1,5 minuty. Kvantifikace probíhala v režimu MRM pro pozitivní i negativní ionizaci s definovanými přechody pro cílové a referenční ionty.

Použitá instrumentace

• Automatizovaný systém CLAM-2000 (Shimadzu)
• HPLC systém Nexera s autosamplerem
• LC-MS/MS přístroj LCMS-8045 (triple quadrupole, ESI Pos/Neg)
• DOSIMYCO™ C8 trap kolonka (4,6×30 mm, 5 μm) a C18 analytická kolonka (2,1×50 mm, 5 μm)

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky byly lineární v rozsahu 0,1–50 mg/L (MPA) a 1–250 mg/L (MPA-G) s r² >0,99. Preciznost intradeních analýz (N=3) vykázala CV 4–9 % a přesnost v rámci ±10 %, což potvrzuje vynikající reprodukovatelnost. Automatizované zpracování zkrátilo čas přípravy na 5 minut na vzorek a umožnilo paralelní provedení LC-MS/MS analýzy, čímž se výrazně zvýšil denní počet vyhodnocených vzorků.

Přínosy a praktické využití metody

Tento plně automatizovaný postup minimalizuje chyby lidského faktoru, zvyšuje kapacitu laboratoře a zkracuje dobu odobrání vzorku k výsledku. Metoda nachází uplatnění v klinické farmacii, výzkumných studiích i v QA/QC farmaceutického průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se integrace dalších terapeutických markerů pro multiplexní analýzy, nasazení umělé inteligence pro optimalizaci dávkovacích režimů a rozšíření automatizace do laboratoří s vysokou propustností. Dalším krokem může být miniaturizace přístrojů a využití mikrofluidních systémů.

Závěr

Studie prokázala, že propojení automatizovaného vzorkovacího modulu CLAM-2000 s vysokocitlivým LC-MS/MS umožňuje rychlou, přesnou a reprodukovatelnou analýzu mykofenolové kyseliny a jejího glukuronidu v plazmě. Tato metoda významně zvyšuje efektivitu farmakokinetických měření a terapeutického monitoringu.

Reference

• Minohata T.; Moreau S.; Dayot F.; Hoeffler J.-F. Integration of mycophenolic acid and its metabolite analysis in plasma using LC-MS/MS with full-automated sample preparation. ALSACHIM SAS & Shimadzu Corporation, 2023.