IMPROVEMENTS IN SENSITIVITY FOR BIOANALYSIS OF WARFARIN USING ACQUITY™ PREMIER UPLC SYSTEM AND XEVO™ TQ ABSOLUTE TANDEM QUADRUPOLE MASS SPECTROMETER

Význam tématu

Bioanalytické metody umožňují kvantifikaci léčiv a jejich metabolitů v biologických maticích, což je zásadní pro vyhodnocení ADMET vlastností v raných fázích vývoje léčiv. Zvýšená citlivost a robustnost těchto metod urychluje rozhodovací proces a snižuje nároky na složité přípravné kroky.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na zlepšení citlivosti stanovení Warfarinu a Furosemidu v lidské a potkaní plasmě pomocí platformy ACQUITY Premier UPLC spojené s tandemovým kvadrupólovým detektorem Xevo TQ Absolute. Cílem bylo dosáhnout nízkých limitů kvantifikace (LLOQ) při zachování jednoduché přípravy vzorků a krátkých analýzních časů.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky lidské a potkaní plasmy byly připraveny přidáním standardních roztoků Warfarinu a Furosemidu (100 ng/mL) pro tvorbu kalibrační křivky v rozsahu 0,025–100 ng/mL a kontrolních vzorků LLOQ, LQC, MQC a HQC. Extrakce proběhla v poměru 1:3 proteinovou precipitací acetonitrilem, následovala centrifugace a transfer supernatantu do LC-MS vialek.

• Chromatograf: ACQUITY Premier UPLC s kolonkou MaxPeak HPS UPLC HSS T3 2,1×50 mm.
• Teplota kolony: 60 °C, teplota vzorků: 5 °C, objem injekce: 1 µL, průtok: 600 µL/min.
• Mobilní fáze A: 0,01 % kyselina formiová ve vodě, B: 0,01 % kyselina formiová v acetonitrilu, gradient 5–95 % B za 1,5 minuty.
• Detektor: Xevo TQ Absolute v režimu ESI negativní ionizace.

Hlavní výsledky a diskuse

Díky technologii MaxPeak High Performance Surfaces se výrazně snížily ztráty analyzátů na kovových površích. Dosáhlo se LLOQ 25 pg/mL pro Warfarin a 100 pg/mL pro Furosemid v obou maticích. Lineární rozsah a charakteristika kalibrační křivky prokázaly koeficient lineárního vztahu R²>0,99. Mezi­denní i vnitrodenní přesnost (%CV) byla pod 12 %, což splňuje přísné bioanalytické akceptační kritérium.

Přínosy a praktické využití metody

Optimalizovaná metoda nabízí:

• Vysokou citlivost pro stopová stanovení v plasmě.
• Rychlou a jednoduchou přípravu vzorků bez nutnosti složité derivatizace.
• Robustní výkon s minimální údržbou detektoru.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření technologií HPS povrchů pro různé typy kovových interakcí, zdokonalení detektorů pro ultra­nízké koncentrace a integrace automatizované přípravy vzorků. Nové generace UPLC-MS systémů mohou umožnit multiplexní analýzy širších panelů léčiv v reálném čase.

Závěr

ACQUITY Premier UPLC se systémem MaxPeak HPS ve spojení s Xevo TQ Absolute poskytují vynikající citlivost a robustnost pro bioanalýzu Warfarinu a Furosemidu. Metoda splňuje náročné požadavky na limity kvantifikace i přesnost a nabízí výrazné zjednodušení workflow v objevné bioanalýze.

Reference

1. Bateman KP, Cohen L, Emary B, Pucci V. Standardized workflows for increasing efficiency and productivity in discovery stage bioanalysis. Bioanalysis. 2013 Jul;5(14):1783–94.
2. Meng M, Wang L, Voelker T, Reuschel S, Van Horne K, Bennett P. A systematic approach for developing a robust LC-MS/MS method for bioanalysis. Bioanalysis. 2013 Jan;5(1):91–115.