LC-MS/MS Method for the Determination of Docetaxel in Human Serum for Clinical Research

Význam tématu

Docetaxel je klíčový antimitotický lék využívaný v chemoterapii nádorových onemocnění. Přesné stanovení jeho koncentrace v lidském séru je zásadní pro farmakokinetické studie, úpravu dávek a monitorování terapie, což vede ke zvýšení účinnosti léčby a snížení rizika nežádoucích účinků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout a validovat rychlou, citlivou a reprodukovatelnou LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci docetaxelu v lidském séru, vhodnou pro klinický výzkum. Autoři předkládají postup extrakce, chromatografické a hmotnostní parametry svázané s vyšší propustností analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorků byla použita pevná fáze extrakce (SOLA SPE 10 mg/2 mL). Vzorky lidského séra (200 µL) byly předčištěny, promíchány s interním standardem (paclitaxel) a extrahovány v následujících krocích:

• Kondicionování patrice: 0,5 mL metanolu, 0,5 mL vody
• Nanesení vzorku: aplikace spiked séra
• Washing: 250 µL vody/acetonitrilu (70:30 v/v)
• Eluce: 2 × 250 µL acetonitrilu s 1 % amoniaku
• Sušení dusíkem a rekonstituce v 200 µL vody/acetonitrilu (50:50 v/v) s 0,5 % 20 µM acetátu sodného

Chromatografická separace probíhala na sloupci Accucore RP-MS (2,6 µm, 50 × 2,1 mm) při 30 °C, gradient od 60 % do 70 % organické fáze během 2 minut, tok 0,6 mL/min, injekce 2,5 µL. Detekce byla uskutečněna na hmotnostním spektrometru Thermo Scientific TSQ Vantage s HESI ionizací v kladném režimu. Kvantifikace vycházela ze sledovaných SRM přechodů docetaxelu (m/z 830,26→549,24) a paclitaxelu jako interního standardu.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odpověď v rozsahu 0,25–10 ng/mL s korelačním koeficientem r2=0,9974. Dolní hranice kvantifikace (LLOQ) 0,25 ng/mL vykazovala čistý chromatogram a dostatečný signál. Precizita opakovaných měření QC vzorků (0,3; 1,5; 6 ng/mL) byla ≤8,8 % CV a přesnost odchýlení koncentrací byla v rozmezí −4,6 % až +6,9 %. Průměrné procento recovery při 0,75 ng/mL činilo 109 %, což dokládá vysokou účinnost extrakce a nízké matrix efekty.

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinutá metoda nabízí:

• Rychlou analýzu se zkrácenou cyklovou dobou 2 minuty
• Vysokou citlivost a reprodukovatelnost měření
• Minimální spotřebu vzorku i rozpouštědel
• Jednoduchou přípravu vzorku bez složitého ošetření

Tento postup je vhodný pro klinické farmakokinetické studie, monitorování pacientů a výzkum nových léčebných schémat.

Budoucí trendy a možnosti využití

Budoucí vývoj může zahrnovat:

• Automatizaci přípravy vzorků v 96-jamkových formátech pro vyšší kapacitu
• Integraci s vysokoštěrbinovými hmotnostními spektrometry pro ještě vyšší citlivost
• Adaptaci metody na další taxoidy či polymorfní metabolity
• Využití pokročilých datových analýz a strojového učení pro lepší interpretaci farmakokinetických dat

Závěr

Popisovaná LC-MS/MS metoda s použitím SOLA SPE a Accucore RP-MS sloupců je validní, rychlá a citlivá pro stanovení docetaxelu v lidském séru. Splňuje požadavky klinického výzkumu na přesnost, preciznost a nízkou LLOQ.

Reference

• Jones J., Denbigh J. LC-MS/MS Method for the Determination of Docetaxel in Human Serum for Clinical Research. Thermo Fisher Scientific Application Note 20581, 2012.