LC-MS/MS Method for the Determination of Paclitaxel in Human Serum

Význam tématu

Paclitaxel je protinádorový lék využívaný v chemoterapii při léčbě různých typů karcinomů. Spolehlivé stanovení jeho koncentrace v lidském séru je klíčové pro optimální dávkování, sledování farmakokinetiky a zajištění bezpečnosti pacientů.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem bylo vyvinout rychlou, citlivou a reprodukovatelnou LC–MS/MS metodu pro kvantifikaci paclitaxelu v lidském séru. Studie demonstruje použití SOLA SPE produktů pro efektivní extrakci vzorků a Accucore RP-MS HPLC kolony pro dosažení dvouminutové separace se zachováním vynikající kvality analytických signálů.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda zahrnuje tyto kroky:

• Příprava vzorku: odměření 200 µl lidského séra, přídavek interního standardu (docetaxel) a paclitaxelového standardu, promíchání a odstředění.
• SPE extrakce: kondicionování SOLA cartridgí 0,5 ml methanolu a 0,5 ml vody, aplikace vzorku, praní vodou/acetonitrilem (70:30 v/v) a eluce acetonitrilem s 1 % amoniaku. Koncentrace eluátu, vysušení a rekonstituce v 200 µl směsi voda/acetonitril + 0,5 % 20 µM octanu sodného.
• Chromatografie: HPLC systém Dionex UltiMate 3000 RSLC s kolonkou Accucore RP-MS (2.6 µm, 50×2.1 mm), mobilní fáze A – voda s 0.1 % kyseliny mravenčí, B – methanol s 0.1 % kyseliny mravenčí. Gradient 60→70 % B během 2 minut, průtok 0.6 ml/min, teplota 30 °C, injekční objem 2.5 µl.
• MS/MS detekce: Triple quadrupole TSQ Vantage v režimu HESI, pozitivní ionizace, přechody paclitaxel m/z 876.3→308.3 a interní standard 830.3→549.2, kolizní energie 25 V (paclitaxel) a 23 V (docetaxel).
• Software pro vyhodnocení: Thermo Scientific LC QUAN.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární kalibrační křivku v rozmezí 0.1–10 ng/ml s koeficientem r² = 0.9982. Dolní limit kvantifikace (LLOQ) činil 0.1 ng/ml. Precize stanovení (n = 6) při třech QC úrovních (0.3, 1.5, 6 ng/ml) byla ≤ 6.6 % CV. Obnovení (recovery) paclitaxelu bylo 116 %, což dokládá účinné uvolnění látky během SPE extrakce. Rychlý dvouminutový cyklus dovoluje vysokou propustnost vzorků bez ztráty citlivosti či selektivity.

Přínosy a praktické využití metody

Výsledná metoda nabízí:

• Vysokou propustnost vzorků vhodnou pro biomedicínské a klinické laboratoře.
• Minimální spotřebu rozpouštědel a jednoduchou přípravu vzorků díky SOLA SPE.
• Dostatečnou citlivost pro monitorování nízkých koncentrací paclitaxelu v klinických studiích.
• Širokou škálu aplikací: terapeutické monitorování, farmakokinetické studie a QC laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

Budoucí vývoj může zahrnovat:

• Automatizované platformy pro SPE a LC–MS/MS k dalšímu zvýšení propustnosti.
• Integraci vysoce výkonných a nízkobjemových mikrofluídních systémů.
• Přechod na vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro komplexní metabolomické a proteomické studie.

Závěr

Navržená LC–MS/MS metoda s využitím SOLA SPE a kolony Accucore RP-MS poskytuje rychlou, spolehlivou a citlivou kvantifikaci paclitaxelu v lidském séru. Metoda kombinuje vysokou propustnost, nízké nároky na objem rozpouštědel a vynikající analytické parametry, což ji předurčuje pro široké uplatnění v klinických i výzkumných laboratořích.

Použitá instrumentace

• HPLC: Thermo Scientific Dionex UltiMate 3000 RSLC
• Kolona: Accucore RP-MS 2.6 μm, 50 × 2.1 mm
• MS: Thermo Scientific TSQ Vantage
• Software: Thermo Scientific LC QUAN

Reference

V textu nebyly uvedeny externí literární zdroje.