LC-MS/MS Method for the Determination of Diclofenac in Human Plasma

Význam tématu

Diclofenac je nesteroidní protizánětlivý lék široce používaný v klinické praxi k léčbě bolesti a zánětu. Jeho spolehlivá stanovení v lidské plazmě jsou klíčová pro farmakokinetické studie, monitorování léčby a zajištění kvality v bioanalytických laboratořích.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo vyvinout rychlou, citlivou a reprodukovatelnou LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci diclofenacu v lidské plazmě. Metoda využívá pevnou fázi extrakce (SPE) s produkty SOLA pro efektivní přípravu vzorku a kolonu Accucore RP-MS pro rychlou chromatografii s jedno­minutovým cyklem.

Použitá metodika a instrumentace

Pro čištění vzorku byla použita SPE na kartáčcích Thermo Scientific SOLA (10 mg/1 mL). Po nanesení plazmy obohacené o vnitřní standard (diclofenac-d4) a kyseliny mravenčí byly vzorky promyty a eluovány acetonitrilem. Suchá residua byla rekonstituována ve směsi vody a acetonitrilu.
Instrumentace:

• UHPLC Accela 600 s kolonnou Accucore RP-MS (2.6 µm, 50 × 2.1 mm)
• MS detektor TSQ Vantage s HESI ionizací v negativním módu
• SPE jednotka Thermo Scientific 96 well plate vacuum manifold

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární kalibraci v rozsahu 1–1000 ng/mL (r² = 0.999). Limit kvantifikace (LOQ) byl stanoven na 1 ng/mL. Opakovatelnost (n = 6) při 15 ng/mL dosáhla < 4.4 % CV. Průměrná procentuální recovery diclofenacu z humaní plazmy byla 85.8 %. Tyto výsledky potvrzují vysokou citlivost, přesnost a reprodukovatelnost metody.

Přínosy a praktické využití metody

Rychlý chromatografický cyklus (1 min), nízká spotřeba rozpouštědel a jednoduchá příprava vzorku umožňují vysokopropustné analýzy v bioanalytických a klinických laboratořích. Metoda je vhodná pro farmakokinetické studie i rutinní monitorování léčby diclofenacem.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj automatizovaných platových formátů SPE, integrace s online vzorkovači a rozšíření na vícenásobné analyty přispějí k dalšímu zvýšení throughputu. Vývoj modulárních metod může umožnit paralelní stanovení dalších NSAID nebo metabolitů v komplexních matricích.

Závěr

Navržená LC-MS/MS metoda kombinuje efektivní SPE s rychlou chromatografií a poskytuje spolehlivou a citlivou analýzu diclofenacu v lidské plazmě. Vysoká linearita, nízký LOQ a dobrá reprodučnost činí metodu vhodnou pro široké spektrum bioanalytických aplikací.

Reference

• Jones J. LC-MS/MS Method for the Determination of Diclofenac in Human Plasma. Thermo Fisher Scientific Application Note AN20569, 2012.