LC-MS/MS Method for the Determination of Docetaxel in Human Serum for Clinical Research

Význam tématu

Docetaxel je klíčový antimitotický lék používaný v chemoterapii nádorových onemocnění. Jeho přesná kvantifikace v lidské krvi je nezbytná pro farmakokinetické studie, monitorování terapií a vývoj nových léčebných protokolů. Rychlé a spolehlivé metody pro měření nízkých koncentrací docetaxelu podporují klinický výzkum a zvyšují bezpečnost pacientů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo vyvinout rychlou, citlivou a reprodukovatelnou LC-MS/MS metodu pro stanovení docetaxelu v lidském séru s použitím interního standardu. Metoda kombinuje extrakci pomocí SOLA SPE materiálu a chromatografii na Accucore RP-MS sloupci s rychlým dvouminutovým cyklem.

Použitá metodika

Vzorek 200 µl séra byl obohacen o standard docetaxelu a interní standard (paclitaxel), protřepán a odstředěn. Extrakce probíhala na 10 mg SOLA SPE deskách s následujícími kroky:

• Podmínění: 0,5 ml methanolu, 0,5 ml vody
• Naložení vzorku
• Praní: 250 µl vody/acetonitrilu (70:30 v/v)
• Eluce: 2 × 250 µl acetonitrilu s 1 % amoniaku
• Sušení pod dusíkem, rekonstituce v 200 µl vody/acetonitrilu (50:50 v/v) s 0,5 % 20 µM octanu sodného

Chromatografie byla prováděna gradientem 60–70 % fáze B (methanol s 0,1 % kyseliny mravenčí) během 2 minut na kolonce Accucore RP-MS (2,6 µm, 50 × 2,1 mm) při 0,6 ml/min a 30 °C. MS detekce v pozitivním režimu HESI monitorovala přechody m/z 830,26→549,24 pro docetaxel a 876,25→308,25 pro interní standard.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific SOLA SPE 10 mg/2 ml desky
• Thermo Scientific Dionex UltiMate 3000 RSLC HPLC systém
• Accucore RP-MS kolona 2,6 µm, 50 × 2,1 mm
• Thermo Scientific TSQ Vantage MS se zdrojem HESI
• Thermo Scientific LCQuan software pro zpracování dat

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odezvu v rozsahu 0,25 až 10 ng/ml s korelačním koeficientem r2 = 0,9974. Nízká mez měřitelnosti (LLOQ) 0,25 ng/ml umožňuje detekci velmi nízkých hladin docetaxelu. Precizita (CV) pro QC vzorky při 0,3, 1,5 a 6 ng/ml byla ≤ 8,8 %. Průměrná míra zotavení látky činila 109 %, což svědčí o vynikající účinnosti extrakce. Rapídní dvouminutový běh kromě nízké spotřeby rozpouštědel zvyšuje průchodnost vzorků.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Vysokou citlivost a spolehlivost měření
• Rychlý dvouminutový chromatografický cyklus vhodný pro vysokokapacitní analýzy
• Nízkou spotřebu vzorků a rozpouštědel
• Jednoduchou přípravu vzorků bez náročné optimalizace

Použití nachází u farmakokinetických studií, sledování terapeutických hladin a vývoje biofarmaceutických postupů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k automatizaci přípravy vzorků, miniaturizaci SPE formátů a integraci s online SPE-LC-MS pro ještě vyšší propustnost. Kombinace s pokročilými datovými platformami a umělou inteligencí může zefektivnit interpretaci a predikci farmakokinetických profilů.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na bázi SOLA SPE a Accucore RP-MS kolony umožňuje rychlé, citlivé a reprodukovatelné stanovení docetaxelu v lidském séru. Metoda nabízí vynikající linearitu, přesnost, zotavení a vysokou propustnost analytických dávek vhodnou pro klinický výzkum a farmakokinetické studie.

Reference

Jones J, Denbigh J. LC-MS/MS Method for the Determination of Docetaxel in Human Serum for Clinical Research. Thermo Fisher Scientific; Application Note 20581, 2012.