Converting a ChP Method of Related Compounds Analysis in Human Insulin to Agilent InfinityLab Poroshell 120 Columns

Význam tématu

Kontrola kvality lidského insulinu vyžaduje spolehlivou analýzu souvisejících sloučenin. Tradiční metoda Čínské farmakopey používá 5 µm C18 kolony s gradientem přes 70 minut, což vede k nízké účinnosti, nedostatečnému rozlišení a dlouhým analýzám. Zvýšení výkonu je klíčové pro dodržení předpisů a vyšší propustnost laboratoří.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo převést metodu analýzy souvisejících sloučenin lidského insulinu podle ČP z tradičních 5 µm kolon na Agilent InfinityLab Poroshell 120 kolony s povrchově porézními částicemi a zlepšit účinnost, rozlišení a zkrátit dobu analýzy.

Použitá metodika

• Mobilní fáze A: 0,2 mol/L sulfát v acetonitrilu 82/18, pH 2,3
• Mobilní fáze B: acetonitril/voda 50/50
• Upravený gradient a isokratické kroky pro cílový čas retence ~25 min pro lidský insulin
• Poroshell 120 EC-C18 a SB-C18 kolony 3,0 × 100 mm, 2,7 µm
• Porovnání s tradičními ZORBAX Eclipse Plus C18 a SB-C18 4,6 × 250 mm, 5 µm

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity II LC systém
• Quaternární pumpa G7111B
• Autosampler G7129A
• Multikolonový termostat G7116A
• Diode array detektor G4212B

Hlavní výsledky a diskuse

• Poroshell 120 kolony zvýšily účinnost 4–6× oproti 5 µm kolonám
• EC-C18 verze poskytla lepší rozlišení impurit oproti SB-C18
• Doba analýzy zkrácena z 73 min na 20 min při zachování požadavků ČP
• Tvar píku a rozlišení mezi insulinem a A21-desamido formou splnily kritéria ČP
• Reprodukovatelnost retence a plochy vrcholů RSD < 1 %

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zrychlení analýzy a vyšší propustnost vzorků
• Snížení spotřeby rozpouštědel a nákladů na likvidaci
• Zlepšená citlivost a detekce drobných nečistot
• Plná shoda s farmakopejními předpisy a vyšší laboratořní efektivita

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření použití superficially porous kolon pro další peptidy a proteiny
• Integrace s UHPLC systémy pro další zkrácení doby analýzy
• Automatizace přípravy vzorků a vysokorychlostní screening
• Kombinace s MS detekcí pro vyšší selektivitu a identifikaci neznámých impurit

Závěr

Převedení metody na Agilent InfinityLab Poroshell 120 kolony přineslo výrazné zlepšení analytických parametrů včetně účinnosti, rozlišení a rychlosti. Metoda je vhodná pro rutinní kontrolu kvality lidského insulinu s nižšími náklady a vyšší provozní efektivitou.

Reference

1. China Pharmacopoeia 2020 edice III Kapitola Human insulin
2. Agilent Technologies Application Note 5990-9029EN 2011 Converting a ChP Method of Insulin to Poroshell 120 columns