Quantitation of Immunosuppressant Drugs in Whole Blood Using the Prelude- SPLC System and TSQ Endura Mass Spectrometer for Research
Aplikace | 2016 | Thermo Fisher ScientificInstrumentace
Analýza koncentrací imunosupresivních léčiv v celkové krvi je klíčová pro optimální řízení dávkování po transplantacích orgánů a minimalizaci rizika odmítnutí štěpu. Metoda založená na LC-MS/MS umožňuje současné stanovení více sloučenin s vysokou specificitou a citlivostí, což překonává limity tradičních imunotestů.
Cílem studie bylo vyvinout rychlý, citlivý, selektivní a robustní analytický postup pro kvantifikaci cyklosporinu A, takrolimu, sirolimu a everolimu v celkové krvi pomocí kombinace online čištění vzorku (SPLC) a tandemové hmotnostní spektrometrie (TSQ Endura). Metoda byla optimalizována pro výzkumné účely s důrazem na vysokou propustnost a reprodukovatelnost.
Vzorek 200 µl plné krve byl vysrážen přidáním roztoku síranu zinečnatého (0,1 M) a metanolu obsahujícího stabilní izotopové interní standardy. Po centrifugaci se 40 µl supernatantu injektovalo přímo do systému SPLC.
Metoda nabízí celkovou dobu analýzy 5 minut a spotřebu 8,1 ml mobilní fáze na vzorek. Kalibrační křivky pro všechny čtyři sloučeniny byly lineární s R² > 0,9943. Kvantitativní přesnost QC vzorků byla v rámci ±20 % udávaných hodnot. Metoda prokázala reprodukovatelnost i mezi jednotlivými kanály SPLC a umožnila až 576 analýz za 24 hodin při dvoukanálovém provozu.
Očekává se další rozvoj metodiky směrem k plné automatizaci v klinických laboratořích, integraci do laboratorních informačních systémů a rozšíření aplikace na personalizovanou medicínu a terapeutický monitoring dalších lékových tříd. Miniaturizace systémů a nové zdroje ionizace by mohly dále zvýšit citlivost a efektivitu analýz.
Popsaná LC-MS/MS metoda založená na Prelude SPLC a TSQ Endura splňuje požadavky na rychlou, přesnou a robustní analýzu imunosupresiv v plné krvi pro výzkumné účely. Díky online čištění, dvoukanálovému provozu a krátké době běhu nabízí vysokou propustnost a spolehlivost výsledků.
Bill Yu, Joe DiBussolo, Kristine Van Natta, Marta Kozak. Quantitation of Immunosuppressant Drugs in Whole Blood Using the Prelude-SPLC System and TSQ Endura Mass Spectrometer for Research. Thermo Fisher Scientific, Application Note 604, 2016.
Příprava vzorků, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceThermo Fisher Scientific
Souhrn
Význam tématu
Analýza koncentrací imunosupresivních léčiv v celkové krvi je klíčová pro optimální řízení dávkování po transplantacích orgánů a minimalizaci rizika odmítnutí štěpu. Metoda založená na LC-MS/MS umožňuje současné stanovení více sloučenin s vysokou specificitou a citlivostí, což překonává limity tradičních imunotestů.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem studie bylo vyvinout rychlý, citlivý, selektivní a robustní analytický postup pro kvantifikaci cyklosporinu A, takrolimu, sirolimu a everolimu v celkové krvi pomocí kombinace online čištění vzorku (SPLC) a tandemové hmotnostní spektrometrie (TSQ Endura). Metoda byla optimalizována pro výzkumné účely s důrazem na vysokou propustnost a reprodukovatelnost.
Použitá metodika a instrumentace
Vzorek 200 µl plné krve byl vysrážen přidáním roztoku síranu zinečnatého (0,1 M) a metanolu obsahujícího stabilní izotopové interní standardy. Po centrifugaci se 40 µl supernatantu injektovalo přímo do systému SPLC.
Použitá instrumentace
- Prelude SPLC system s TurboFlow™ online extrakcí
- Thermo Scientific TSQ Endura™ triple quadrupole hmotnostní spektrometr
- Heated electrospray ionization (HESI) zdroj
- Cyclone-P™ TurboFlow kolona (0,5×50 mm)
- Accucore™ C8 kolona (3×30 mm, 2,6 µm)
- TraceFinder™ software verze 3.1
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda nabízí celkovou dobu analýzy 5 minut a spotřebu 8,1 ml mobilní fáze na vzorek. Kalibrační křivky pro všechny čtyři sloučeniny byly lineární s R² > 0,9943. Kvantitativní přesnost QC vzorků byla v rámci ±20 % udávaných hodnot. Metoda prokázala reprodukovatelnost i mezi jednotlivými kanály SPLC a umožnila až 576 analýz za 24 hodin při dvoukanálovém provozu.
Přínosy a praktické využití metody
- Vyšší propustnost díky dvoukanálovému režimu a online čištění
- Snížení pracovních kroků příprav vzorku a chybovosti
- Vysoká selektivita SRM detekce pro více látek v jedné analýze
- Možnost rozšíření panelu analyzovaných imunosupresiv
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se další rozvoj metodiky směrem k plné automatizaci v klinických laboratořích, integraci do laboratorních informačních systémů a rozšíření aplikace na personalizovanou medicínu a terapeutický monitoring dalších lékových tříd. Miniaturizace systémů a nové zdroje ionizace by mohly dále zvýšit citlivost a efektivitu analýz.
Závěr
Popsaná LC-MS/MS metoda založená na Prelude SPLC a TSQ Endura splňuje požadavky na rychlou, přesnou a robustní analýzu imunosupresiv v plné krvi pro výzkumné účely. Díky online čištění, dvoukanálovému provozu a krátké době běhu nabízí vysokou propustnost a spolehlivost výsledků.
Reference
Bill Yu, Joe DiBussolo, Kristine Van Natta, Marta Kozak. Quantitation of Immunosuppressant Drugs in Whole Blood Using the Prelude-SPLC System and TSQ Endura Mass Spectrometer for Research. Thermo Fisher Scientific, Application Note 604, 2016.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Evaluation of Benchtop Quadrupole Orbitrap Ultra-High-Resolution Mass Spectrometer in Rapid Quantitative Analysis of Immunosuppressant Drugs in Blood Samples
2016|Thermo Fisher Scientific|Postery
Methods Calibrators Calibrators containing cyclosporin A, everolimus, sirolimus, and tacrolimus in whole blood were purchased from Chromsystems Instruments & Chemicals GmbH (TABLE 1). Evaluation of Benchtop Quadrupole Orbitrap Ultra-High-Resolution Mass Spectrometer in Rapid Quantitative Analysis of Immunosuppressant Evaluation of Benchtop…
Klíčová slova
cyclosporin, cyclosporintacrolimus, tacrolimuseverolimus, everolimussirolimus, sirolimusquantifier, quantifierrelative, relativeimmunosuppressant, immunosuppressantanalyte, analyteabundance, abundanceblood, bloodascomycin, ascomycinquadrupole, quadrupolepositive, positiveclinical, clinicalorbitrap
Analysis of Immunosupressant Drugs in Whole Blood Using a High-Efficiency Method on an Affordable High-Resolution Mass Spectrometer
2015|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
Appli cat i on N ote 6 3 2 Analysis of Immunosupressant Drugs in Whole Blood Using a High-Efficiency Method on an Affordable High-Resolution Mass Spectrometer Mindy Gao, Marta Kozak Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA Key Words Table 1.…
Klíčová slova
inject, injectexactive, exactivecyclosporin, cyclosporintacrolimus, tacrolimussirolimus, sirolimuseverolimus, everolimusfocus, focuscollaborator, collaboratorimmunosuppressant, immunosuppressantquantifier, quantifierspectrometer, spectrometermass, masswere, weremethod, methodblood
Analysis of Cyclosporine, Everolimus, Sirolimus, and Tacrolimus in Whole Blood for Clinical Research
2018|Waters|Aplikace
[ APPLICATION NOTE ] Analysis of Cyclosporine, Everolimus, Sirolimus, and Tacrolimus in Whole Blood for Clinical Research Stephen Balloch, Lisa Calton, and Gareth Hammond Waters Corporation, Wilmslow, UK APPLICATION BENEFITS ■■ Analytical selectivity afforded by chromatography and highly selective mass…
Klíčová slova
everolimus, everolimuscyclosporine, cyclosporinesirolimus, sirolimustacrolimus, tacrolimusquantifier, quantifierqualifier, qualifiertqd, tqdclinical, clinicalapplication, applicationuplc, uplcacquity, acquitynote, noteclass, classwaters, watersxevo
Exemplary performance data of a Triple Quadrupole Mass Spectrometer in a Simulated Clinical LDT Workflow
2020|Thermo Fisher Scientific|Postery
Exemplary performance data of a Triple Quadrupole Mass Spectrometer in a Simulated Clinical LDT Workflow BC Cha, Mindy Gao, Kristine Van Natta, Terry Olney, Maurino Flora, John Glazier, Thermo Fisher Scientific, S355 River Oaks Parkway San Jose, CA 95134, USA…
Klíčová slova
qciii, qciiiqcv, qcvsirolimus, sirolimusqci, qcirsd, rsdcyclosporina, cyclosporinatacrolimus, tacrolimuseverolimus, everolimusestrone, estronetestosterone, testosteroneldt, ldtimprecision, imprecisionloq, loqcyclosporin, cyclosporincapability
