Determination of Lipophilic Marine Biotoxins in Molluscs by LC-MS/MS using Offline Extraction

Význam tématu

Algalní toxiny v mořských měkkýších představují významné riziko pro veřejné zdraví a bezpečnost potravin. Lipofilní biotoxiny, jako okadové kyseliny, dinofyzistoxiny, pectenotoxiny, azaspiracidy a yessatoxiny, zůstávají v produktech z mořských plodů i po tepelném zpracování. Přesná a spolehlivá analýza těchto toxinů je klíčová pro kontrolu kvality a prevenci otrav.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl validovat harmonizovaný postup EU pro stanovení lipofilních mořských biotoxinů v mlžích náročnou metodou LC-MS/MS s offline extrakcí. Výsledkem má být rychlý, selektivní, citlivý a reprodukovatelný analytický protokol splňující legislativní limity.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky homogenizované tkáně měkkýšů byly extrahovány v methanolu, následně očištěny na C18 SPE cartridgiích. Pro separaci a detekci byla použita kapalinová chromatografie Thermo Scientific Accela UHPLC s analytickým sloupcem Hypersil GOLD 50×2,1 mm, 1,9 μm a trojitý kvadrupólový hmotnostní spektrometr Thermo Scientific TSQ Quantum Ultra s H-ESI II zdrojem v režimu SRM. Parametry gradientu, tok mobilní fáze a optimalizovaná přechodová iontová SRM srážková energie byly definovány pro každý analyzovaný toxin.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Thermo Scientific Accela
• Kolona Hypersil GOLD 50×2,1 mm, 1,9 μm
• MS/MS Thermo Scientific TSQ Quantum Ultra
• Zdroje H-ESI II pro pozitivní i negativní režim

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou lineárnost kalibračních křivek s koeficienty r2 nad 0,99 v rozsahu 2–50 μg/kg. Mez detekce (LOD) se pohybovala od 0,56 μg/kg (AZA-1) do 5,66 μg/kg (DTX-1) a mez kvantifikace (LOQ) od 1,11 μg/kg do 10,45 μg/kg. Mezi­denní opakovatelnost vyjádřená CV% byla nižší než 20 %, přičemž u většiny toxinů klesala pod 10 %. Průměrné procento zotavení analyzátů se pohybovalo mezi 93 a 108 %, což potvrzuje účinné zotavení při extrakci a čištění.

Přínosy a praktické využití metody

Validated metoda umožňuje spolehlivý monitoring lipofilních mořských biotoxinů v souladu s regulací EU 853/2004 a 15/2011. Díky nízkým hodnotám LOD/LOQ a vysoké selektivitě MS/MS lze metodu využít v laboratořích potravinářské kontroly a výzkumných pracovištích pro rutinní testování vzorků měkkýšů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace automatizovaných extrakčních technik pro zvýšení propustnosti analýzy.
• Rozšíření detekce o nové toxiny a metabolity spojené s klimatickými změnami a rozšířením harmful algal blooms.
• Nasazení vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro neznámé nebo vzácné varianty biotoxinů.

Závěr

Navržená LC-MS/MS metoda s offline extrakcí je rychlá, citlivá a vysoce reproducibilní pro kvantifikaci lipofilních mořských biotoxinů v bivalvách. Splňuje požadavky evropských norem a je vhodná pro rutinní laboratorní použití v oblasti bezpečnosti potravin.

Reference

1. Regulation (EC) No 853/2004 of the European Parliament and of the Council of 29 April 2004.
2. Commission Regulation (EU) No 15/2011 of 10 January 2011.
3. Commission Regulation (EC) No 2074/2005 of 5 December 2005.
4. EU-RL-MB, EU-Harmonised Standard Operating Procedure for determination of Lipophilic marine biotoxins in molluscs by LC-MS/MS – Version 3, 2011.
5. UNICHIM Manual N. 179/0, 1999.