Validated Method for the Analysis of Lipophilic Marine Biotoxins in Bivalves by Liquid Chromatography—High-Resolution Mass Spectrometry

Význam tématu

Aplikovaná analýza lipofilních mořských biotoxinů v mlžích je klíčová pro ochranu spotřebitele a udržení kvality a bezpečnosti potravin živočišného původu. Hydrolýza toxinů a jejich akumulace v korýších mohou způsobit závažné gastrointestinální i neurologické poruchy. Regulace EU vyžaduje spolehlivou kvantitativní metodu pro kontrolu hladin biotoxinů.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ověřit a validovat rychlou, jednoduchou a ekonomickou metodu pro potvrzovací kvantifikaci lipofilních mořských biotoxinů v čerstvých a sterilovaných mlžích v souladu s legislativou EU. Metoda respektuje limity stanovené v nařízeních (EC) 853/2004 a (EU) 786/2013.

Použitá metodika

Metoda QuEChERS zahrnuje extrakci toxických látek acetonitrilem při přidání NaCl a MgSO4, následné čištění disperzní SPE s C18 a koncentrování pod dusíkem. Pro okadaové toxiny je zařazen krok hydrolytického rozkladu esterů. Stanovení se provádí UHPLC-HRMS/MS s přesností lepší než 5 ppm.

Použitá instrumentace

• UHPLC Thermo Scientific Accela s C18 kolonkou (100 × 2,1 mm, 1,7 µm)
• Q Exactive™ Quadrupole-Orbitrap MS v režimu tandemové hmotnostní spektrometrie
• Thermo Scientific TraceFinder software v. 3.1

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila kvantifikaci širokého spektra MBTX (okadaová kyselina, dinofysistoxiny, azaspiracidy, pectenotoxiny, yessotoxiny) v koncentracích od 25 µg/kg do 350 µg/kg. Linearity dosahovala r2 ≥ 0,9998, retribuce 79–114 % a RSD 1,5–18,7 %. Metoda byla ověřena na čerstvých i sterilovaných vzorcích různých mlžních druhů bez matričních interferencí. Analýza certifikovaných referenčních materiálů prokázala shodu s deklarovanými hodnotami, trueness 91–105 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá příprava vzorku s použitím QuEChERS šetří čas a náklady
• Vysoká citlivost a selektivita UHPLC-HRMS/MS splňuje legislativní limity
• Možnost analýzy různých druhů mlžů se stejnou kalibrační křivkou SMMS
• Metoda vhodná pro rutinní kontrolní laboratoře i výzkumné účely

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj nástrojů vysoko­rozlišovací hmotnostní spektrometrie s vyššími rychlostmi skenování a vylepšenou selektivitou. Integrace mikrofluidních systémů a automatizace preparativních kroků dále zefektivní workflow. Potenciál mají také nové přístupy k simultánnímu stanovení širšího spektra toxických metabolitů a validace in-field testů pro rychlou detekci v terénu.

Závěr

Validovaná QuEChERS-UHPLC-HRMS/MS metoda nabízí robustní, citlivé a legislativně vyhovující řešení pro monitorování lipofilních mořských biotoxinů v mlžích. Je ekonomická, univerzálně použitelná pro různé druhy bivalv a umožňuje vysokou přesnost a spolehlivost analytických výsledků.

Reference

1. Rúbies A. et al. New method for the analysis of lipophilic marine biotoxins in fresh and canned bivalves by liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry: A Quick, Easy, Cheap, Efficient, Rugged, Safe approach. J. Chrom. A. 2015, 1386:62-73. doi:10.1016/j.chroma.2015.01.088
2. Regulation (EC) No 853/2004 of the European Parliament and of the Council, 29 April 2004.
3. Commission Regulation (EU) No 786/2013 of 16 August 2013 amending Annex III to Regulation (EC) No 853/2004.