Quantitative LC-MS Analysis of 14 Benzodiazepines in Urine Using TraceFinder 1.1 Software and High Resolution Accurate Mass

Význam tématu

Analýza benzodiazepinů v moči je klíčová v klinické toxikologii, forenzní chemii a léčebném monitoringu. Rychlé, citlivé a spolehlivé metody kvantifikace těchto psychoaktivních látek zajišťují kvalitu péče o pacienty, prevenci zneužívání a podporují rozhodování v klinických studiích.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo představit novou workflow-řízení metodu pro kvantitativní stanovení 14 benzodiazepinů v moči pomocí benchtop vysokodozorového Exactive hmotnostního spektrometru a softwaru TraceFinder 1.1. Studie demonstruje kompletní proces od přípravy vzorku po generování konečné zprávy.

Použitá metodika a instrumentace

Protokol přípravy vzorků spočívá v přidání deuterovaných interních standardů, hydrolýze beta-glukuronidázou, následné precipitaci acetonitrilem a centrifugaci. Supernatant se zředil a analyzoval spektrometricky.

• LC podmínky: Hypersil GOLD PFP kolona 100 × 2,1 mm, 5 µm, izokratické nebo gradientní eluční podmínky při pokojové teplotě.
• MS podmínky: Exactive s HESI-II ionizátorem, pozitivní režim, rozlišení 100 000 (FWHM při m/z 200), m/z okno izolace 3 ppm, scanový rozsah 135–600 m/z.
• Parametry ionizace: 350 °C vaporizer a kapilára, spray voltage 3 500 V, sheath gas 40 AU, aux gas 10 AU.
• Softwarová platforma: TraceFinder 1.1 pro tvorbu CDS, Master Method, řízení běhů, real-time monitoring, datovou revizi a generování reportů.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární rozsah stanovení 5–1000 ng/mL pro všech 14 analyzovaných benzodiazepinů s přesností 85,4–106,0 % a vnitro- i mezibatchové CV 0,5–11,7 %. LLOQ 5 ng/mL bylo dosaženo u všech sloučenin a extrahované iontové chromatogramy potvrdily dobrou selektivitu a vysoké rozlišení.^
Real-time monitoring a vestavěné flagy v TraceFinderu umožnily rychlou identifikaci problémů, jako je drift retenčního času nebo variace poměru iontů. Reportovací šablony pak zrychlily přípravu kalibračních a QC zpráv.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace této workflow-řízené metody přináší řešení pro klinická a výzkumná laboratoře:

• Snadné zavedení a standardizace napříč laboratorními přístroji Thermo Scientific.
• Minimalizace školení personálu díky jednotnému softwarovému rozhraní.
• Zrychlená příprava metod, běhů a reportů s vysokou mírou automatizace.
• Vysoká citlivost a robustnost vhodná pro velkokapacitní screening i validované kvantitativní analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření analogického workflow na další skupiny léčiv a metabolitů s využitím pokročilých HRAM instrumentů a cloud-based datové platformy. Integrace umělé inteligence do zpracování dat by mohla dále zlepšit detekci neznámých sloučenin a automatizovat kontrolu kvality. Dále vznikají příležitosti pro miniaturizaci přípravy vzorků a nasazení v terénních aplikacích.

Závěr

Workflow-řízená metoda s Exactive spektrometrem a TraceFinder 1.1 softwarem poskytuje rychlé, citlivé a reprodukovatelné stanovení 14 benzodiazepinů v moči. Kombinace snadné obsluhy, komplexní správy dat a modulárního nastavení reportů posouvá rutinní kvantitativní analýzu na vyšší úroveň efektivity a spolehlivosti.