Quantification of 35 benzodiazepines in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research

Význam tématu

Benzodiazepiny jsou široce předepisovaná psychofarmaka s vysokým rizikem zneužití a významnou variabilitou farmakokinetiky. Přesná a rychlá kvantifikace těchto látek v plazmě je klíčová pro klinický výzkum, terapeutický drug monitoring i forenzní aplikace.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout robustní a validovanou metodu pro kvantitativní analýzu 35 benzodiazepinů v lidské plazmě s vysokou selektivitou, citlivostí a krátkým časem analýzy (7 minut). Metoda je optimalizována pro požadavky klinického výzkumu.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky (50 µl plazmy) byly zpracovány offline precipitací bílkovin (100 µl precipitantu s interními standardy), poté centrifugovány a 50 µl supernatantu bylo injikováno. Chromatografické rozlišení probíhalo na Vanquish Flex Binary UHPLC se 7minutovým gradientem při 0,6 ml/min a injekčním objemu 2 µl. Detekce byla realizována na Orbitrap Exploris 120 s HESI v pozitivním režimu v módu Full scan – ddMS2 (rozlišení 60 000, m/z 70–450). Data zpracováno v TraceFinder 5.1.

Použitá instrumentace

• Vanquish Flex Binary UHPLC
• Orbitrap Exploris 120 MS s HESI
• TraceFinder 5.1
• ClinMass LC-MS/MS kalibrátory, kontroly a interní standardy od RECIPE Chemicals

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární odezvu s 1/x vážením pro všechny analyty. Bias mezi nominální a zpětně vypočtenou koncentrací se pohyboval mezi −13,5 % a +8,8 %. Intra-assay přesnost byla ≤7,1 % CV, inter-assay ≤9,7 % CV. LLOQ se pohybovaly mezi 0,17 a 24 µg/l. Nebyl pozorován významný carryover.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza 35 látek za 7 minut
• Jednoduchá příprava vzorků precipitací bílkovin
• Vysoká selektivita a citlivost díky HRAM-MS
• Vhodné pro klinický výzkum, monitorování léčby i forenzní analýzy

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší nasazení HRAM-MS v rutinních laboratořích, automatizace přípravy vzorků a rozšíření metody o další psychoaktivní látky. Pokročilé analýzy dat a digitalizace workflow zvýší throughput a usnadní správu výsledků.

Závěr

Vyvinutá metoda je rychlá, citlivá a reprodukovatelná a poskytuje spolehlivou kvantifikaci 35 benzodiazepinů v lidské plazmě, splňující požadavky klinického výzkumu na přesnost a linearitu.