Sample Preparation Method for Determination of GS-441524 (Remdesivir Metabolite) in Plasma Using ISOLUTE® ENV+ SPE Columns
Aplikace | 2021 | BiotageInstrumentace
Určování hladin GS-441524, hlavního plazmatického metabolitu antivirotika remdesivir, je klíčové pro optimalizaci terapie COVID-19 a dalších koronavirů. Pevná fáze extrakce (SPE) s využitím ISOLUTE ENV+ poskytuje čisté vzorky pro citlivou kvantifikaci metodou LC-MS/MS a umožňuje přesné dávkování pacientům skrze terapeutický monitoring.
Studie představuje validovanou přípravu vzorku plazmy pomocí ISOLUTE ENV+ SPE kolonek pro extrakci GS-441524 a interního standardu doripenem. Cílem bylo dosáhnout vysoké selektivity, opakovatelné čistoty extraktu a široké kalibrační křivky vhodné pro klinický TDM.
Vzorek 200 µl plazmy obohacené doripenem (0,1 µg/ml) se denaturoval a stabilizoval 200 µl roztoku 10 mmol/l amonného formiátu s 0,1 % kyseliny mravenčí. Kolonka byla postupně kondicionována metanolem a ekvilibrována amonným formiátem. Vzorek se naložil, promyl interferující matrice a eluoval ve dvou krocích: nejprve vodou:methanolem (8:2) a poté čistým methanolem. Eluát se smísil a naředil před LC-MS/MS analýzou.
Metoda poskytla věrnou a přesnou kvantifikaci GS-441524 v rozsahu 1–100 ng/ml (po 10× ředění), což odpovídá klinickému rozmezí 10–1000 ng/ml. Kalibrační křivka vykazovala koeficient lineární regrese ≥0,999. Obnovení v plazmě dosahovalo 86,7–98,9 % při nízkých i vysokých koncentracích a matrice faktor zůstal v rozmezí 0,5–9,3 %, což potvrzuje účinné odstranění interferencí.
Metoda umožňuje spolehlivý monitoring léčebných hladin GS-441524 u pacientů s koronavirovou infekcí. Vysoká recovery, nízké matriční efekty a široký dynamický rozsah podporují personalizované dávkování a snižují riziko toxicity či nedostatečné účinnosti.
Rozvoj podobných SPE přístupů pro další virové metabolity a antivirotika může zefektivnit TDM v klinické praxi. Integrace automatizovaných SPE systémů a miniaturizované LC-MS/MS platformy podpoří rychlejší a vysoce průtokovou analýzu.
Použití ISOLUTE ENV+ SPE spolu s LC-MS/MS poskytuje robustní, citlivou a reprodukovatelnou metodu pro kvantifikaci GS-441524 v plazmě. Tato workflow přispívá k bezpečnější a efektivnější antivirové terapii prostřednictvím spolehlivého TDM.
Příprava vzorků, Spotřební materiál, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceShimadzu, Biotage
Souhrn
Význam tématu
Určování hladin GS-441524, hlavního plazmatického metabolitu antivirotika remdesivir, je klíčové pro optimalizaci terapie COVID-19 a dalších koronavirů. Pevná fáze extrakce (SPE) s využitím ISOLUTE ENV+ poskytuje čisté vzorky pro citlivou kvantifikaci metodou LC-MS/MS a umožňuje přesné dávkování pacientům skrze terapeutický monitoring.
Cíle a přehled studie / článku
Studie představuje validovanou přípravu vzorku plazmy pomocí ISOLUTE ENV+ SPE kolonek pro extrakci GS-441524 a interního standardu doripenem. Cílem bylo dosáhnout vysoké selektivity, opakovatelné čistoty extraktu a široké kalibrační křivky vhodné pro klinický TDM.
Použitá metodika a instrumentace
Vzorek 200 µl plazmy obohacené doripenem (0,1 µg/ml) se denaturoval a stabilizoval 200 µl roztoku 10 mmol/l amonného formiátu s 0,1 % kyseliny mravenčí. Kolonka byla postupně kondicionována metanolem a ekvilibrována amonným formiátem. Vzorek se naložil, promyl interferující matrice a eluoval ve dvou krocích: nejprve vodou:methanolem (8:2) a poté čistým methanolem. Eluát se smísil a naředil před LC-MS/MS analýzou.
Použitá instrumentace
- UHPLC: Shimadzu Nexera LC-30AD
- Kolonka: Waters ACQUITY UPLC BEH C18, 1.7 µm, 2.1×50 mm
- MS/MS: Shimadzu LCMS-8060, ESI pozitivní režim, SRM detekce (GS-441524 m/z 292.20→202.20; doripenem m/z 420.90→274.00)
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda poskytla věrnou a přesnou kvantifikaci GS-441524 v rozsahu 1–100 ng/ml (po 10× ředění), což odpovídá klinickému rozmezí 10–1000 ng/ml. Kalibrační křivka vykazovala koeficient lineární regrese ≥0,999. Obnovení v plazmě dosahovalo 86,7–98,9 % při nízkých i vysokých koncentracích a matrice faktor zůstal v rozmezí 0,5–9,3 %, což potvrzuje účinné odstranění interferencí.
Přínosy a praktické využití metody
Metoda umožňuje spolehlivý monitoring léčebných hladin GS-441524 u pacientů s koronavirovou infekcí. Vysoká recovery, nízké matriční efekty a široký dynamický rozsah podporují personalizované dávkování a snižují riziko toxicity či nedostatečné účinnosti.
Budoucí trendy a možnosti využití
Rozvoj podobných SPE přístupů pro další virové metabolity a antivirotika může zefektivnit TDM v klinické praxi. Integrace automatizovaných SPE systémů a miniaturizované LC-MS/MS platformy podpoří rychlejší a vysoce průtokovou analýzu.
Závěr
Použití ISOLUTE ENV+ SPE spolu s LC-MS/MS poskytuje robustní, citlivou a reprodukovatelnou metodu pro kvantifikaci GS-441524 v plazmě. Tato workflow přispívá k bezpečnější a efektivnější antivirové terapii prostřednictvím spolehlivého TDM.
Reference
- Biotage. Application Note AN959: Sample Preparation Method for Determination of GS-441524 in Plasma Using ISOLUTE ENV+ SPE Columns. 2021.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Method Development Guidelines: Solid Phase Extraction Using ISOLUTE® ENV+ for the Extraction of Aqueous Samples
2020|Biotage|Technické články
Method Development Guidelines: Solid Phase Extraction Using ISOLUTE ENV+ for the Extraction of Aqueous Samples | Page 1 ® L 6 mL Method Development Guidelines: Solid Phase Extraction Using ISOLUTE ENV+ for the Extraction of Aqueous Samples F 70 mL…
Klíčová slova
rensa, rensaisolute, isoluteelution, elutionenv, envpolar, polarsolvent, solventethyl, ethylsorbents, sorbentsionizable, ionizableaverage, averageinterferences, interferencesinterference, interferencematerial, materialacetate, acetatepore
Method Development Guidelines: Solid Phase Extraction Using ISOLUTE® 101 SPE Columns for the Extraction of Aqueous Samples
2020|Biotage|Technické články
Method Development Guidelines: Solid Phase Extraction Using ISOLUTE 101 SPE Columns for the Extraction of Aqueous Samples ® | Page 1 Method Development Guidelines: Solid Phase Extraction Using ISOLUTE 101 SPE Columns for the Extraction of Aqueous Samples ® ISOLUTE…
Klíčová slova
rensa, rensaisolute, isolutepolar, polarelution, elutionsorbents, sorbentsnon, nonendcapped, endcappedaverage, averagesorbent, sorbentinterference, interferencepore, poresolvation, solvationenv, envanalyte, analytesolvent
Extraction of Acrylamide from Cooked Foodstuffs Using ISOLUTE® Multimode Columns
2020|Biotage|Aplikace
Application Note IST1076A.V.1 Extraction of Acrylamide from Cooked Foodstuffs Using ISOLUTE Multimode | Page 1 ® Extraction of Acrylamide from Cooked Foodstuffs Using ISOLUTE Multimode Columns ® Condition Solvate the column with acetonitrile (1 mL). Equilibration Rinse with water (2…
Klíčová slova
rensa, rensaacrylamide, acrylamideaverage, averagepore, porecooked, cookedisolute, isolutefoodstuffs, foodstuffsmultimode, multimodeexhibits, exhibitstitleusing, titleusingquantities, quantitiesofinformation, ofinformationquantity, quantitylifetime, lifetimeequilibration
Sample Preparation by Mixed-Mode SPE Using ISOLUTE® HAX
2020|Biotage|Technické články
Sample Preparation by Mixed-Mode SPE Using ISOLUTE HAX | Page 1 ® Sample Preparation by Mixed-Mode SPE Using ISOLUTE HAX ® This technical note describes the extraction of acidic drugs from biological fluids using ISOLUTE HAX mixed-mode SPE products. ®…
Klíčová slova
rensa, rensaisolute, isolutehax, haxtabless, tablessaverage, averagedrugs, drugsspe, specol, colextraction, extractionapplying, applyingacidic, acidicvacuum, vacuummixed, mixedsample, sampleshort
