Sample Preparation by Mixed-Mode SPE Using ISOLUTE® HAX

Význam tématu

V bioanalytické chemii je extrakce kyselých léčiv z biologických vzorků klíčová pro přesné stanovení stopových hladin a minimalizaci rušivých vlivů matice. Tradiční přístupy často neposkytují požadovanou selektivitu, což vede k vyššímu pozadí a snížené reprodukovatelnosti měření.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem technické poznámky je představit selektivní extrakční protokol pro kyselá farmaka z biologických tekutin za použití mixed-mode sorbentu ISOLUTE HAX. Článek popisuje optimalizovaná pracovní schémata pro sloupky a 96-well desky o náplni 25 mg, včetně kroků předúpravy, elučních postupů a parametrů vakuového či tlakového systému.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda kombinuje dvě retenční interakce: hydrofobní a silnou aniontoměnu. Klíčové kroky postupu:

• Kondicionování sorbentu metanolem
• Equilibrace pH formiovou kyselinou (pH 2)
• Naložení zředěného vzorku (1:1 s formiovou kyselinou)
• Eluce interferencí puferem amonným acetátem a směsí metanol/voda 50:50
• Eluce kyselých analytů metanol/ocetná kyselina (98:2)

Instrumentace:

• ISOLUTE HAX mixed-mode SPE sorbenty (25 mg/1 mL sloupce a tabless 96well desky)
• Biotage VacMaster™-10/-20 vakuové manifoldy
• Biotage VacMaster™96 vakuový manifold pro 96-well formát
• Biotage PRESSURE+96 pozitivní tlakový manifold
• Biotage Extrahera™ pro automatizovanou manipulaci se vzorky

Hlavní výsledky a diskuse

Prokázala se vysoká čistota extraktu s omezením koexktrahovaných složek i při nízkých koncentracích analytů. Metoda neprokazuje průnik analytů až do 1 mL vzorku plazmy, přičemž hydrofobní retence zůstává stabilní i při variabilní iontové síle matrice. Dvojfázové eluční kroky efektivně oddělují interferující substance, což vede k výraznému snížení matričního pozadí v LC-MS analýze.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazná redukce matričních interferencí
• Vysoká reprodukovatelnost a robustnost sorbentu při opakovaných cyklech
• Široké využití v biofarmaceutickém vývoji, toxikologii i QA/QC laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

Vývoj směřuje k miniaturizaci SPE formátů pro vysokopropustné platformy, dalšímu zdokonalení chemie sorbentů a integraci s ultrarychlou chromatografií a hmotnostní spektrometrií. Dále se očekává širší využití ekologičtějších rozpouštědel a plná automatizace vzorkových příprav.

Závěr

Mixed-mode SPE se sorbentem ISOLUTE HAX představuje efektivní a selektivní přístup pro extrakci kyselých léčiv z biologických matric. Díky kombinaci hydrofobních a iontových interakcí poskytuje vysoce čisté extrakty připravené pro citlivou LC-MS analýzu a nabízí potenciál dalšího využití v různých analytických aplikacích.

Reference

• Biotage. Sample Preparation by Mixed-Mode SPE Using ISOLUTE HAX. Technical Note TN127.V.1, 2020.