Sample Preparation Method for Determination of Axitinib in Plasma Using ISOLUTE® SLE+

Význam tématu

Určení hladin axitinibu v plazmě je klíčové pro monitorování terapeutického účinku a minimalizaci nežádoucích účinků u pacientů s renálním karcinomem.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem poznámky je představit rychlou a spolehlivou metodu přípravy vzorků založenou na podporované kapalinné extrakci (SLE+) pro kvantifikaci axitinibu v lidské plazmě za využití UHPLC-MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika zahrnuje:

• Přidání vnitřního standardu osimertinibu (5 ng/mL) k 200 µL plazmy a ředění 200 µL vodou, vortex 30 s
• Podporovaná kapalinná extrakce na ISOLUTE SLE+ kolonkách (400 µL vzorku), absorpce 5 min
• Eluce metyl-terc-butyl etherem (2×900 µL), gravitačně nebo jemným tlakem
• Odpaření N2 a rekonce 2 mL vody:metanolu (1:1, v/v)
• UHPLC: ACQUITY UPLC BEH C18 (2,1×50 mm, 1,7 µm), mobilní fáze 10 mmol/L NH4OAc a acetonitril, gradient, 0,4 mL/min, 40 °C, injekce 1 µL
• MS/MS: Shimadzu LCMS-8060, ESI+, SRM přechody axitinib m/z 387,40→356,05 (Rt 2,14 min), osimertinib m/z 500,30→72,15 (Rt 2,43 min)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární rozsah 0,01–25 ng/mL axitinibu (r2 ≥0,9999). Detekovány byly dva píky izomerů axitinibu, k analýze byl použit pík při 2,14 min. Obnova po extrakci přesahovala 95 % ve všech testovaných koncentracích (0,5; 5,0; 50,0 ng/mL) a matriční efekty byly minimální. Chromatogramy neukázaly rušení od endogenních složek plazmy.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoké zotavení analytu a reprodukovatelnost oproti tradiční LLE
• Eliminace emulzí a zkrácení doby přípravy díky SLE+ technologii
• Citlivost a přesnost vhodná pro terapeutické monitorování axitinibu
• Možnost vysokoproduktivních 96-jamek formátů pro klinické laboratoře

Budoucí trendy a možnosti využití

• Nasazení stabilně izotopově značených interních standardů pro vyšší kvalitu kvantifikace
• Plná automatizace přípravy vzorků a integrace s robotickými systémy
• Rozšíření metody na multiplexní analýzu dalších cílených léčiv
• Použití pokročilých hmotnostních analyzátorů pro detailní studium metabolitů

Závěr

Použití SLE+ extrakce ve spojení s UHPLC-MS/MS poskytuje rychlou, citlivou a robustní metodu pro kvantifikaci axitinibu v plazmě. Vysoké zotavení a minimální matriční efekty ji předurčují k rutinnímu terapeutickému monitorování.

Reference

• Biomedical Chromatography. 2018;32:e4147