Sample Preparation Method for Determination of Mycophenolic Acid in Plasma Using ISOLUTE® SLE+

Význam tématu

Mykofenolová kyselina je klíčovým aktivním metabolitem imunosupresiva mykofenolát mofetilu používaného k prevenci rejece po transplantaci. Monitorování její koncentrace v plazmě (TDM) je nezbytné k optimalizaci dávkování, zajištění terapeutického účinku a minimalizaci vedlejších účinků.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout spolehlivou a rychlou metodu přípravy vzorku a stanovení mykofenolové kyseliny v plazmě pacientů. Studie demonstruje využití podporované extrakce kapalina–kapalina (SLE) pomocí kolonek ISOLUTE SLE+ pro zjednodušení předúpravy, kompatibilní s UV a LC–MS/MS detekcí.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek 200 µl plazmy byl okyselen 2 % kyselinou mravenčí a doplněn indometacinem jako interním standardem. Následovala extrakce na kolonách ISOLUTE SLE+ s použitím MTBE pro eluaci cílové látky. Extrakt byl vysušen dusíkem a rekonstituován vodou : methanol 1 : 1.

• UHPLC: Shimadzu Nexera LC-30AD, kolona BEH C18 1,7 µm (2,1×50 mm), 0,1 % kyselina mravenčí/voda a acetonitril, gradient 5–95 % B, 0,4 ml/min, 40 °C, injekce 1 µl.
• MS/MS: Shimadzu LCMS-8060, ESI+, SRM přechody m/z 321 → 207 pro mykofenolovou kyselinu a m/z 358 → 139 pro indometacin.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární rozsah 0,1–200 ng/ml (r2 ≥ 0,999), pokrývající klinicky relevantní úrovně 0,5–20 µg/ml. Obnova analyzované látky překročila 90 % při všech koncentracích. Matrixové faktory byly nižší než 21 %, což potvrzuje efektivní odstranění interferencí z plazmy.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zjednodušuje přípravu vzorků díky eliminaci emulzí a využití tlakové pomoci, zkracuje čas a zvyšuje reprodukovatelnost. Výsledná citlivost LC–MS/MS dovoluje přesné kvantifikace mykofenolové kyseliny pro TDM v klinických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další automatizace a miniaturizace extrakčních postupů, rozvoj multimodálních sorbentů pro širší spektrum analyzovaných látek a integrace s vysoce rozlišovacími hmotnostními spektrometry pro komplexní farmakokinetické studie.

Závěr

Popsaná SLE+ metoda nabízí rychlou, citlivou a vysoce selektivní proceduru pro stanovení mykofenolové kyseliny v plazmě. Vyšší obnova a nízké matrixové efekty podporují její nasazení v rutinním TDM a farmakokinetickém výzkumu.

Reference

Biotage. Sample Preparation Method for Determination of Mycophenolic Acid in Plasma Using ISOLUTE SLE+, Application Note AN926, 2019.