What can MaxPeak Premier Columns do for your protein SEC analysis?

Význam tématu

Size exclusion chromatography (SEC) je klíčová metoda pro charakterizaci proteinů, zejména monomerů, agregátů a velikostních variant. Robustnost, reprodukovatelnost a vysoká citlivost těchto analýz jsou nezbytné pro vývoj a kontrolu kvality terapeutických bílkovin.

Cíle a přehled studie / článku

Článek představuje vlastnosti a výkon kolon MaxPeak Premier pro proteinovou SEC analýzu. Studie hodnotí vliv mobilní fáze s různými koncentracemi soli a pH na rozlišení a obnovu analyzovaných proteinů, včetně modelového monoklonálního protilátky rituximab.

Použitá metodika a instrumentace

• Kolony: XBridge Premier a ACQUITY Premier Protein SEC 250 Å, částice 1,7 µm a 2,5 µm, rozměry 4,6×150 mm, 4,6×300 mm a 7,8×300 mm
• Mobilní fáze: AutoBlend Plus s fosfátovým pufrem a NaCl (50–400 mM), pH 5,8–7,6
• Parametry: průtok 0,3–0,75 mL/min, teplota 25–35 °C, disperze LC systému <10 µL
• Detekce: UV absorbance při 214 nm a 280 nm
• Instrumentace: ACQUITY UPLC H-Class Bio

Hlavní výsledky a diskuse

• Maximální obnovu a citlivost díky hybridnímu BEH povrchu functionalizovanému hydroxy-terminovaným polyethylenoxidem (PEO)
• Konstantní a reprodukovatelné retence přes rozsah pH 5,8–7,6 a solných koncentrací 50–400 mM
• Vysoké rozlišení velikostních variant monoklonálních protilátek a fúzních proteinů, např. IgG1, IgG2, Fc-fúze
• Nízká disperze kapalinového chromatografu přispívá k ostrým píkům a přesné kvantifikaci

Přínosy a praktické využití metody

Platformní SEC metoda výrazně snižuje čas a náklady na vývoj metody, zajišťuje robustní analýzu pro QC biopharmaceutik a je kompatibilní s MS aplikacemi. Kolony jsou testovány s referenčním standardem mAb Size Variant pro zajištění konzistence mezi šaržemi.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další vývoj povrchově upravených částic pro minimalizaci interakcí analyta s povrchem
• Implementace high-throughput SEC platforem a online integrace s hmotnostní spektrometrií
• Využití strojového učení pro optimalizaci metod a predikci chování proteinů

Závěr

MaxPeak Premier kolony přinášejí vysoce reprodukovatelnou a citlivou separaci proteinů v SEC, zvyšují efektivitu a spolehlivost analýz v oblasti vývoje a kontroly kvality bioterapeutik.

Reference

Není uvedena žádná literární reference.