Analysis of Amino Acids

Význam tématu

Analýza aminokyselin je zásadní součástí biochemických, farmaceutických a potravinářských aplikací. Precizní stanovení těchto látek pomáhá při monitorování kvality proteinových hydrolyzátů, sledování metabolických drah a kontrole nutričního složení potravin.

Cíle a přehled studie / článku

Prezentovaná metoda popisuje separaci čtyř modelových aminokyselin (asparagová kyselina, glutamin, threonin a prolin) pomocí reverzní fáze LC s iontově párovým činidlem. Cílem je ukázat optimální mobilní fázi a provozní podmínky zajišťující kompletní rozlišení a reprodukovatelnost analýzy.

Použitá instrumentace

• Kolona Shim-pack GISS C18, 250 × 4,6 mm I.D., 5 µm
• Mobilní fáze A: 5 mM IPCC-08 (sodná sůl 1-oktansulfonátu) v 0,1 % H3PO4 ve vodě; fáze B: acetonitril; poměr A/B = 95/5 (v/v)
• Průtok 1,0 mL/min, teplota kolony 40 °C
• Detekce UV při 210 nm
• Objem injekce 10 µL

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje dobrého rozlišení všech čtyř aminokyselin na základě iontově párové interakce s mobilní fází. Retenční časy jsou v rozumném časovém rozmezí, zajištěná je ostrá špička a reprodukovatelnost pod 1 % RSD. Iontově párové činidlo zlepšuje retenci polárních aminokyselin a minimalizuje šířku špiček. Diskuse se zaměřuje na vliv koncentrace IPCC-08 a pH mobilní fáze na selektivitu separace.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou a spolehlivou analýzu aminokyselin v různých matricích, včetně potravinových vzorků či biologických roztoků. Uplatnění nachází v kvalitativním i kvantitativním stanovení, validaci výrobních procesů a biologickém sledování metabolitů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Trendem je přechod na UHPLC pro kratší analýzy a menší spotřebu mobilní fáze, integrace s hmotnostní spektrometrií pro zvýšenou citlivost i selektivitu a využití ekologičtějších iontově párových činidel. Dále se rozšiřuje automatizace přípravy vzorků a aplikace v metabolomice a proteomice.

Závěr

Popsaná reverzní fáze LC s iontově párovým činidlem představuje robustní a reprodukovatelnou metodu pro separaci a stanovení vybraných aminokyselin. Jednoduché nastavení provozních parametrů usnadňuje adaptaci v rutině QC i výzkumných laboratořích.

Reference

• Shimadzu Corporation. Analysis of Amino Acids. First Edition: Dec. 2021. ERAS-1000-0226.