Analysis of Nucleic Acid Related Substances

Význam tématu

Analýza nukleových kyselin a jejich derivátů je klíčová v biochemii a farmaceutickém výzkumu. Umožňuje sledovat metabolity, kontrolovat kvalitu biotechnologických produktů a studovat enzymatické procesy.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace je demonstrovat separaci šesti nukleotidů a souvisejících látek pomocí reverzní fáze HPLC na sloupci Shim-pack GIST C18-AQ. Studie uvádí chromatografické podmínky, složení mobilní fáze a časový program eluce.

Použitá metodika a instrumentace

• Vysokotlaká kapalinová chromatografie: systém NexeraTM
• Kolona: Shim-pack GIST C18-AQ (100 mm × 3,0 mm, 3 μm)
• Mobilní fáze:
  – A: voda/acetonitril 100/1 s 0,15 mol/L kyseliny fosforečné a 0,225 mol/L triethylaminu
  – B: voda/acetonitril 80/20 s 0,15 mol/L kyseliny fosforečné a 0,225 mol/L triethylaminu
• Průtok: 0,8 mL/min
• Teplota kolony: 30 °C
• Objem injekce: 10 μL
• Detekce: PDA při 260 nm
• Gradientní program: 0 % B (0–3,5 min) → 12 % B (do 11 min) → 100 % B (11,01–18 min) → návrat na 0 % B (18,01–28 min)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila rozlišení šesti látek: hypoxanthin (Hx), inosinová kyselina (IMP), inosin (HxR), AMP, ADP a ATP při koncentraci 10 μmol/L. Dosáhlo se ostrých píků, vysoké opakovatelnosti retencí a dobré citlivosti detekce při 260 nm.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a spolehlivá analýza klíčových metabolitů nukleových kyselin
• Využití v biotechnologii pro kontrolu kvality produktů
• Vhodné pro studium enzymatických reakcí a farmakokinetických studií

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro strukturovou identifikaci
• Vývoj rychlejších UHPLC metod s menšími částicemi výplně
• Ekologicky šetrné mobilní fáze a automatizované platformy
• Vysokoprůtokový screening pro průmyslové QA/QC

Závěr

Popisovaná metoda na sloupci Shim-pack GIST C18-AQ poskytuje robustní a reprodukovatelnou separaci nukleotidů a příbuzných sloučenin. Díky vysoké účinnosti a spolehlivosti je vhodná pro výzkum i průmyslovou praxi v oblasti analytické biochemie.

Reference

• Application News L.536, Shimadzu Corporation, 2021
• Shim-pack GIST C18-AQ Column, Shimadzu Product Catalogue
• NexeraTM HPLC System Reference Manual, Shimadzu Corporation