Analysis of Nucleic Acid Related Substances in Fish Meat and Automatic Calculation of Freshness (K Value) Using Multi-Data Report Function

Význam tématu

Rychlé a spolehlivé stanovení čerstvosti rybího masa je klíčové pro zajištění bezpečnosti potravin a prevenci potravinových otrav.
Změny koncentrace ATP a jeho rozpadových produktů (ADP, AMP, IMP, inosinu, hypoxanthinu) slouží jako standardní ukazatel rozkladu svaloviny.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo optimalizovat HPLC metodu s gradientní elucí pro rychlé stanovení K-hodnoty (K-value) u tuňáka.
Metoda využívá Nexera LC systém s jednoduchou konfigurací a funkci multi-data report pro automatické vyhodnocení a grafické zobrazení výsledků.

Použitá metodika

• Chromatografická kolona: Shim-pack™ GIST 3 μm C18 AQ (100×3,0 mm).
• Mobilní fáze: A) voda/acetonitril 100/1 s 0,15 mol/L kyseliny fosf., 0,225 mol/L triethylaminu; B) voda/acetonitril 80/20 se stejným složením přísad.
• Gradient: 0–3,5 min 0%B → 11 min 12%B → 11–18 min 100%B → 18–28 min 0%B.
• Průtok 0,8 mL/min, teplota kolony 30 °C, objem injekce 10 μL, detekce PDA 260 nm.
• Extrakce svaloviny: homogenéza 2 g tuňáka v 10 % perchlor. kyselině, následně 2× extrakce v 5 % roztoku, neutralizace KOH a filtrace.

Použitá instrumentace

• Vysokoúčinná kapalinová chromatografie: Nexera LC (Shimadzu).
• Detektor diodové pole: PDA 260 nm.
• Software LabSolutions DB/CS pro multi-data report.

Hlavní výsledky a diskuse

• Reprodukovatelnost: RSD <1 % retence i plocha.
• Linearita: R2 ≥0,9999 pro všech 6 derivátů ATP ve stanovených rozsazích.
• K-hodnota u aljašského a žlutoploutvého tuňáka rostla se skladovací dobou v důsledku poklesu ATP a nárůstu hypoxanthinu.
• Po 300 vstupech žádné významné zhoršení tlakového režimu nebo účinnosti kolony (pokles <10 %).
• Automatizovaná funkce multi-data report umožnila rychlou tvorbu grafů a sledování změn K-hodnoty.

Přínosy a praktické využití metody

Rychlá, přesná a automatizovaná analýza umožňuje monitorovat čerstvost ryb v potravinářských provozech.
Metodu lze snadno implementovat v QA/QC laboratořích i v rámci regulérních kontrol kvality.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace inline monitoringu v rámci výrobních linek.
• Rozšíření na další druhy mořských plodů a mas.
• Miniaturizace a mobilní HPLC systémy pro pole.
• Využití strojového učení pro prediktivní modely rozkladu.

Závěr

Navržená HPLC metoda doplněná o multi-data report přináší robustní a efektivní nástroj pro určení čerstvosti rybího masa.
Díky jednoduché konfiguraci, vysoké reprodukovatelnosti a automatizaci lze metodu široce využít v potravinářském průmyslu.

Reference

• Usui Shigeru, Watanabe Etsuo, Comparison of freshness changes in fresh and frozen black marlin via K-value, 2012.