Analysis of Amino Acids Using Automatic Pretreatment Function of LC System

Význam tématu

Simultánní kvantifikace 20 proteinogenních aminokyselin je zásadní v biochemii, farmacii, potravinářství a klinické diagnostice. Rychlá a přesná analýza těchto sloučenin umožňuje kontrolu kvality, sledování metabolických procesů a vývoj nových terapeutických přístupů.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a demonstrovat robustní metodiku pro simultánní stanovení primárních i sekundárních aminokyselin za využití reverzní fáze kapalinové chromatografie s automatickou prekolonovou derivatizací. Studie představuje optimalizovaný gradientní program a detekční podmínky pro kompletní separaci 20 proteinogenních aminokyselin.

Použitá metodika

Derivatizace probíhá ve dvou krocích: OPA/merkaptopropionová kyselina pro primární aminokyseliny a FMOC pro sekundární. Reakční směs se automaticky přivádí před kolonu, čímž se minimalizuje manuální práce i variabilita.

Použitá instrumentace

• LC systém: Shimadzu Prominence-i (LC-2030C)
• Kolona: Shim-pack XR-ODSII (100 mm × 3,0 mm I.D., 2,2 μm)
• Mobilní fáze: A) 20 mmol/l acetátový pufr (pH 6), B) voda/acetonitril (100/900), C) 20 mmol/l acetátový pufr (pH 5) s 0,5 mmol/l EDTA-2Na
• Gradientní program: 0–17 min nízkotlaký gradient podle časového profilu
• Průtok: 1,0 ml/min; teplota kolony: 40 °C; injekční objem: 1 µl
• Detekce: Fluorescenční detektor (kanál 1 Ex 350 nm/Em 450 nm; kanál 2 Ex 266 nm/Em 305 nm)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila separaci všech 20 aminokyselin do 17 minut s dobrým rozlišením a nízkou mezerovou variabilitou. Automatická derivatizace vedla k vysoké reprodukovatelnosti ploch píků a citlivým detekčním limitům, vhodným pro široké spektrum aplikací.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizace prekolonové derivatizace zkracuje dobu přípravy vzorků a snižuje riziko chyb. Metoda je ideální pro rutinní analýzu v QA/QC laboratořích potravinářského i farmaceutického průmyslu a klinickou biochemii.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se vývoj ekologičtějších mobilních fází, miniaturizace kolón pro ultrarychlé separace a integrace s hmotnostní spektrometrií ke komplexnímu profilu aminokyselin a metabolomice.

Závěr

Předdstavená LC metoda s automatickou prekolonovou derivatizací je robustní, vysoce reprodukovatelná a snadno implementovatelná v různých laboratorních podmínkách pro spolehlivou analýzu 20 proteinogenních aminokyselin.

Reference

• Shimadzu Corporation. Application News L529, Dec. 2021, ERAS-1000-0127.