Pre-column Amino Acid Analysis of Hydrolyzed Pet Food

Pre-column aminokyselinová analýza hydrolyzovaného krmiva pro domácí mazlíčky

Význam tématu

Aminokyselinová analýza hydrolyzovaných krmiv je klíčová pro hodnocení nutriční kvality, určení poměru esenciálních aminokyselin a zajištění bezpečnosti potravinářských produktů pro domácí zvířata.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem studie bylo implementovat automatizovanou pre-column derivatizaci na systému LC-2050C pro analýzu aminokyselin ve vzorcích krmiv po třech typech hydrolyz (HCl, alkalická a performová) s použitím jednotné chromatografické metody.

Použitá metodika

• Hydrolyza vzorků: 6 mol/L HCl, 4,2 mol/L NaOH s 2,2-thiodiethanolem a oxidace kyselinou performovou.
• Automatická pre-column derivatizace: smíchání vzorku s MPA/OPA a FMOC reagenciemi přímo v jehle autosampleru.
• Chromatografie: gradientní eluce na kolóně Shim-pack XR-ODSII (100×3,0 mm, 2,2 μm), mobilní fáze A (acetátový/borecitátový pufr), B (voda/ACN), C (EDTA/pufr), průtok 1,0 mL/min, teplota 40 °C.
• Detekce: fluorescenční detektor RF-20Axs (Ex 350/450 nm a Ex 266/305 nm).

Použitá instrumentace

• Shimadzu LC-2050C s automatickou pre-column funkcí
• Fluorescenční detektor RF-20Axs
• Kolona Shim-pack XR-ODSII (100 mm × 3,0 mm, 2,2 μm)
• Autosampler s ochlazováním vzorku (4 °C)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla vynikajících linearit (r2 > 0,999) pro standardní aminokyseliny v rozmezí 2,5–100 μmol/L. Opakovatelnost měření (RSD, n=6) byla pod 1 % pro většinu aminokyselin, kromě proline a cysteové kyseliny, kde dosáhla cca 4 %. Chromatogramy reálných vzorků prokázaly jasné oddělení a kvantifikaci všech cílových aminokyselin ve třech typech hydrolyzátů.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizovaná derivatizace výrazně redukuje čas a pracovní náročnost, eliminuje variabilitu manuálních zásahů a umožňuje analýzu různých typů vzorků na jednom analyzátoru. Metoda je vhodná pro rutinní QA/QC laboratoře i výzkumná pracoviště zaměřená na vývoj krmiv a nutriční studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné směry dalšího rozvoje zahrnují integraci on-line modulů pro automatizaci dalších derivatizací, rozšíření na analýzu peptidů a bioaktivních molekul, implementaci umělé inteligence pro optimalizaci podmínek a adaptaci na nové generace HPLC systémů.

Závěr

Implementace automatické pre-column derivatizace na platformě LC-2050C umožňuje rychlou, reprodukovatelnou a vysoce citlivou analýzu aminokyselin v hydrolyzovaných krmivech. Tato metoda přispívá ke zvýšení efektivity laboratoří a podpoře vývoje vysoce kvalitních a výživově vyvážených krmiv.

Reference

1. Analysis of Methionine Sulfone and Cysteic Acid Using Automated Pretreatment Functions, 01-00709-EN
2. Standard table of food composition in Japan 2020 8th edition amino acid composition table, Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries