Simultaneous Analysis of Amino Acids Using Automatic Pretreatment Function of Prominence-i Integrated LC System

Význam tématu

Analýza aminokyselin je klíčová v potravinářství, farmacii i biologickém výzkumu. Přesná kvantifikace proteinogenních i funkčních aminokyselin umožňuje sledovat nutriční hodnotu potravin, kontrolovat kvalitu farmaceutických přípravků a provádět biochemické studie metabolických drah.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem tohoto Application Note (L529A) je představit automatizovanou pre-kolónovou derivatizaci aminokyselin na systému Prominence-i (LC-2030C) se zjednodušenou přípravou vzorku. Studie demonstruje simultánní stanovení 20 proteinogenních aminokyselin a rozšířenou analýzu dalších čtyř funkčních aminokyselin (citrullin, taurine, theanin, GABA).

Použitá metodika a instrumentace

Pre-kolónová derivatizace probíhá v injekční jehle se sekvenčním aspirací:

• Derivatační činidla: o-ftalaldehyd (OPA), 9-fluorenylmethyl chloroformát (FMOC), 3-merkaptopropionová kyselina
• Mobilní fáze: A) 20 mmol/L acetátový pufr (pH 6), B) voda/acetonitril (100/900), C) 20 mmol/L acetátový pufr (pH 5) s 0,5 mmol/L EDTA-2Na
• Kolona: Shim-pack XR-ODS II (100 mm × 3,0 mm, 2,2 µm)
• Systém: Shimadzu Prominence-i (LC-2030C) s automatickou předúpravou vzorku
• Detekce: fluorescenční detektor (kanál 1 Ex 350 nm/Em 450 nm, kanál 2 Ex 266 nm/Em 305 nm)
• Průtok: 1,0 mL/min, teplota kolony: 40 °C, objem injekce: 1 µL

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatogram simultánního stanovení 20 aminokyselin ukázal jasné a dobře oddělené píky za 14 min. Linearity koeficienty (r2) překročily 0,9993 a opakovatelnost ploch píku (%RSD) byla pod 0,9 % pro všechny složky. Rozšířená analýza 23 aminokyselin včetně GABA a theaninu prokázala vhodnost metody pro sledování funkčních aminokyselin. Analýza piva demonstrovala praktické použití metody v reálných matricích.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizovaná pre-kolónová derivatizace výrazně zkracuje dobu přípravy vzorku a eliminuje nutnost externího míchání či uchovávání reaktorových vials. Metoda minimalizuje spotřebu vzorku i činidel a zvyšuje reprodukovatelnost měření. Vysoká citlivost a robustnost umožňují nasazení v rutinní laboratoři QA/QC, potravinářských i farmaceutických aplikacích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další integrace automatických předúprav vzorku s vysokotlakými systémy UHPLC pro ještě rychlejší analýzu. Kombinace s hmotnostní spektrometrií může rozšířit počet sledovaných analy­tů. Dalším směrem je vývoj derivatizačních reagentů pro neproteo­gen­ní aminokyseliny a biogenní aminy.

Závěr

Automatizovaná pre-kolónová derivatizace na Prominence-i poskytuje rychlou, citlivou a vysoce reprodukovatelnou analýzu široké škály aminokyselin. Díky jednoduchému nastavení a minimálnímu zásahu obsluhy je metoda ideální pro rutinní i výzkumné aplikace.

Reference

Shimadzu Corporation. Application News No. L529A: Simultaneous Analysis of Amino Acids Using Automatic Pretreatment Function of Prominence-i Integrated LC System. First Edition: Jan. 2019; Second Edition: Jan. 2020.