LC-MS/MS Method for the Determination of Testosterone using an Accucore C8 HPLC Column

Význam tématu

Správné stanovení hladiny testosteronu je klíčové pro několik oblastí biomedicínského výzkumu, klinické diagnostiky i sportovní kontroly. Monitorování hladin tohoto anabolického hormonu pomáhá sledovat účinnost hormonální substituční terapie u pacientů s nedostatkem testosteronu a zároveň odhalovat neoprávněné použití u sportovců. Vysoká citlivost a rychlost analýzy jsou nezbytné pro spolehlivá a efektivní rozhodování v klinické i forenzní praxi.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit rychlou LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci testosteronu s využitím kolony Accucore C8 (2,6 µm, 50 × 2,1 mm). Klíčovým požadavkem bylo dosažení cyklu kratšího než 2 minuty, excelentní tvaru piků a vysoké reprodukovatelnosti měření.

Použitá metodika a instrumentace

• Chromatograf: Thermo Scientific Accela 600.
• Kolona: Accucore C8, 2,6 µm, 50 × 2,1 mm.
• Mobilní fáze A: voda + 0,1 % kyseliny mravenčí, B: acetonitril + 0,1 % kyseliny mravenčí.
• Gradient: 5 → 95 % B za 0,8 minuty.
• Průtok: 1,5 mL/min, teplota kolony: 60 °C, objem injekce: 5 µL.
• Proplachy injektoru: 80:20 voda/acetonitril a 45:45:10 IPA/acetonitril/acetone.

Použitá instrumentace

• LC-MS/MS systém: Thermo Scientific TSQ Vantage.
• Ionizace: HESI v pozitivním režimu, napětí 4000 V, vaporizer 425 °C, kapilára 350 °C.
• Detekce přechodů (SRM): 289,14 → 97,08 a 109,06 m/z, kolizní energie 20 a 22 V.
• Software pro zpracování dat: Thermo Scientific LC QUAN.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje velmi rychlého separačního cyklu 1,5 minuty s retenční dobou testosteronu přibližně 0,73 min. Chromatogram při koncentraci 20 ng/mL vykázal ostrý a symetrický pik bez nežádoucího táhnutí. Šestiměření repeticí potvrdilo vysokou reprodukovatelnost s relativními smyškovými odchylkami 0,22 % pro retenční čas a 3,01 % pro plošný integrál.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda kombinuje vysokou rychlost analýzy s vynikající účinností a robustností separace. Díky nízkému tlaku na sloupci a sníženým sekundárním interakcím core-shell technologie je vhodná jak pro klinické laboratoře, tak pro rutinní dopingová testování ve sportu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj lze očekávat ve směru ještě menších core-shell částic a zdokonalených fází pro zvýšení kapacity a selektivity. Integrace s automatizovanými vysokopropustnými systémy a multiplexními injektory umožní paralelní zpracování vzorků a výrazné zkrácení doby analýzy.

Závěr

Popsaná LC-MS/MS metoda na Accucore C8 kolonce poskytuje rychlé, přesné a reprodukovatelné stanovení testosteronu. Vysoká efektivita separace a krátký analyzační cyklus ji předurčují k širokému nasazení v klinických a forenzních laboratořích i pro kontrolu dopingu.

Reference

• Phipps K. LC-MS/MS Method for the Determination of Testosterone using an Accucore C8 HPLC Column. Thermo Fisher Scientific Application Note 20493, 2012.