Quantification of eight antimycotics in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research
Aplikace | 2021 | Thermo Fisher ScientificInstrumentace
Správné dávkování a monitorování antivirotických látek je klíčové pro úspěšnou léčbu těžkých plísňových infekcí, zejména u imunosuprimovaných pacientů. Různá biologická variabilita a interakce vedou k odlišným plazmatickým koncentracím i při stejném režimu podání. Vysoce rozlišená hmotnostní spektrometrie (HRAM-MS) nabízí výhody v selektivitě a zkrácení času až o desítky procent oproti tradičním HPLC-UV metodám.
Cílem bylo vyvinout a validovat rychlou a citlivou LC-HRAM-MS metodu pro simultánní kvantifikaci osmi antimykotik ve vzorcích lidské plazmy. Metoda byla implementována na platformě Thermo Scientific, s důrazem na jednoduchou přípravu vzorku, krátkou dobu analýzy (3,6 min) a plnění klinicky relevantních parametrů přesnosti, linearity a opakovatelnosti.
Vzorky: 50 µl lidské plazmy bylo denaturováno 100 µl acetonitrilu obsahující interní standardy. Po vortexování a odstředění byl supernatant ředěn vodou na 500 µl a podán na kolonu.
Chromatografie: Vanquish Flex Binary UHPLC; kolona Hypersil GOLD 50 × 2,1 mm, 1,9 µm při 40 °C; mobilní fáze A voda + 0,1 % kyseliny mravenčí, B acetonitril + 0,1 % kyseliny mravenčí; gradient 3,6 min, průtok 0,5 ml·min–1, injekce 2 µl.
Detekce: Orbitrap Exploris 120 s HESI v pozitivním režimu; full scan ddMS2 (100–750 m/z), rozlišení 60 000, kolizní energie 30 %; data zpracována v TraceFinder 5.1.
Hodnocení metody: linearita (korel. koeficient > 0,99), přesnost (% bias ±15 %), opakovatelnost intra‐ a inter‐denní (%CV ≤ 8,4 %), žádné pozorovatelné přenášení (carryover).
Metoda prokázala výbornou linearitu napříč stanovenými koncentracemi pro všech osm látek. Bias mezi nominálními a zjištěnými hodnotami se pohyboval v rozsahu –7,6 % až +7,2 %. Intra-denní opakovatelnost byla vždy pod 8,4 %, inter-denní pod 5,8 %. Analýza trvá pouze 3,6 min, bez potřeby komplexních extrakčních postupů.
Metodu lze rozšířit o další farmakologicky významné látky a adaptovat na workflow automatizované přípravy vzorků. Implementace mikroproudové LC a online SPE by mohla dále zefektivnit spotřebu rozpouštědel a zkrátit čas. Integrace s klinickými informačními systémy umožní on‐line TDM a personalizovanou terapii.
Navržená LC-HRAM-MS metoda poskytuje robustní, rychlý a reprodukovatelný nástroj pro simultánní kvantifikaci osmi antimykotik v lidské plazmě. Splňuje kritéria pro klinický výzkum a nabízí výhody v citlivosti i selektivitě.
Renoulin G., Barcenas M., De Nardi C. Quantification of eight antimycotics in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research. Technical Note 66046, Thermo Fisher Scientific, 2021.
LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS, LC/Orbitrap
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceThermo Fisher Scientific, RECIPE
Souhrn
Význam tématu
Správné dávkování a monitorování antivirotických látek je klíčové pro úspěšnou léčbu těžkých plísňových infekcí, zejména u imunosuprimovaných pacientů. Různá biologická variabilita a interakce vedou k odlišným plazmatickým koncentracím i při stejném režimu podání. Vysoce rozlišená hmotnostní spektrometrie (HRAM-MS) nabízí výhody v selektivitě a zkrácení času až o desítky procent oproti tradičním HPLC-UV metodám.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem bylo vyvinout a validovat rychlou a citlivou LC-HRAM-MS metodu pro simultánní kvantifikaci osmi antimykotik ve vzorcích lidské plazmy. Metoda byla implementována na platformě Thermo Scientific, s důrazem na jednoduchou přípravu vzorku, krátkou dobu analýzy (3,6 min) a plnění klinicky relevantních parametrů přesnosti, linearity a opakovatelnosti.
Použitá metodika
Vzorky: 50 µl lidské plazmy bylo denaturováno 100 µl acetonitrilu obsahující interní standardy. Po vortexování a odstředění byl supernatant ředěn vodou na 500 µl a podán na kolonu.
Chromatografie: Vanquish Flex Binary UHPLC; kolona Hypersil GOLD 50 × 2,1 mm, 1,9 µm při 40 °C; mobilní fáze A voda + 0,1 % kyseliny mravenčí, B acetonitril + 0,1 % kyseliny mravenčí; gradient 3,6 min, průtok 0,5 ml·min–1, injekce 2 µl.
Detekce: Orbitrap Exploris 120 s HESI v pozitivním režimu; full scan ddMS2 (100–750 m/z), rozlišení 60 000, kolizní energie 30 %; data zpracována v TraceFinder 5.1.
Hodnocení metody: linearita (korel. koeficient > 0,99), přesnost (% bias ±15 %), opakovatelnost intra‐ a inter‐denní (%CV ≤ 8,4 %), žádné pozorovatelné přenášení (carryover).
Použitá instrumentace
- UHPLC: Thermo Scientific Vanquish Flex Binary
- Hmotnostní spektrometr: Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120
- Kolona: Thermo Scientific Hypersil GOLD 50 × 2,1 mm, 1,9 µm
- Software: Thermo Scientific TraceFinder 5.1
- Kalibrátory a kontrolní vzorky: RECIPE ClinMass LC-MS/MS
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda prokázala výbornou linearitu napříč stanovenými koncentracemi pro všech osm látek. Bias mezi nominálními a zjištěnými hodnotami se pohyboval v rozsahu –7,6 % až +7,2 %. Intra-denní opakovatelnost byla vždy pod 8,4 %, inter-denní pod 5,8 %. Analýza trvá pouze 3,6 min, bez potřeby komplexních extrakčních postupů.
Přínosy a praktické využití metody
- Rychlá analýza šetří čas a náklady na chromatografii i přípravu vzorku.
- Vyšší selektivita a spolehlivost detekce oproti UV metodám.
- Možnost simultánního stanovení více antimykotik v jednom běhu.
- Vhodné pro terapeutické monitorování (TDM) a klinický výzkum.
Budoucí trendy a možnosti využití
Metodu lze rozšířit o další farmakologicky významné látky a adaptovat na workflow automatizované přípravy vzorků. Implementace mikroproudové LC a online SPE by mohla dále zefektivnit spotřebu rozpouštědel a zkrátit čas. Integrace s klinickými informačními systémy umožní on‐line TDM a personalizovanou terapii.
Závěr
Navržená LC-HRAM-MS metoda poskytuje robustní, rychlý a reprodukovatelný nástroj pro simultánní kvantifikaci osmi antimykotik v lidské plazmě. Splňuje kritéria pro klinický výzkum a nabízí výhody v citlivosti i selektivitě.
Reference
Renoulin G., Barcenas M., De Nardi C. Quantification of eight antimycotics in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research. Technical Note 66046, Thermo Fisher Scientific, 2021.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Quantification of eight antimycotics in human plasma using an Orbitrap Exploris 120 high-resolution accurate mass mass spectrometer for clinical research
2021|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 66064 Quantification of eight antimycotics in human plasma using an Orbitrap Exploris 120 high-resolution accurate mass mass spectrometer for clinical research Authors: Gaëtan Renoulin1, Claudio De Nardi2 Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, France 1 Thermo Fisher Scientific, Reinach,…
Klíčová slova
level, levelitraconazole, itraconazoleantimycotics, antimycoticsisavuconazole, isavuconazoleposaconazole, posaconazolevoriconazole, voriconazoleketoconazole, ketoconazolefluconazole, fluconazoleclinmass, clinmassaverage, averagearb, arbcalculated, calculatedname, nameconcentration, concentrationeight
Quantification of eight antimycotics in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research
2021|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 66059 Quantification of eight antimycotics in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research Authors: Gaëtan Renoulin1, Claudio De Nardi2 Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, France 1 Thermo Fisher Scientific, Reinach, Switzerland 2 Keywords: TraceFinder software,…
Klíčová slova
itraconazole, itraconazolelevel, levelantimycotics, antimycoticsisavuconazole, isavuconazoleposaconazole, posaconazolevoriconazole, voriconazoleketoconazole, ketoconazolefluconazole, fluconazoleclinmass, clinmassquantis, quantiscalculated, calculatedcalibrators, calibratorsaverage, averageconcentration, concentrationtsq
Quantification of nine antimycotic drugs in human plasma or serum by LC-HRAM(MS) for clinical research
2021|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 73904 Quantification of nine antimycotic drugs in human plasma or serum by LC-HRAM(MS) for clinical research Authors: Claudio De Nardi1, Katharina Kern2, Steffen Peters2 Thermo Fisher Scientific GmbH, Dreieich, Germany 2 RECIPE Chemicals + Instruments GmbH, Munich, Germany…
Klíčová slova
itraconazole, itraconazolecalculated, calculatedanidulafungin, anidulafunginconcentration, concentrationaverage, averageisavuconazole, isavuconazoleposaconazole, posaconazoleantimycotic, antimycoticvoriconazole, voriconazolebias, biasketoconazole, ketoconazolefluconazole, fluconazoleantimycotics, antimycoticsnominal, nominalclinmass
Quantification of antimycotics in human plasma or serum by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research
2018|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 65149 Quantification of antimycotics in human plasma or serum by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research Authors Claudio De Nardi, Thermo Fisher Scientific GmbH, Dreieich, Germany Sergio Indelicato, Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, France Keywords Antimycotics, offline…
Klíčová slova
antimycotics, antimycoticshydroxyitraconazole, hydroxyitraconazoleconcentration, concentrationaverage, averageisavuconazole, isavuconazolecalculated, calculatedposaconazole, posaconazoleitraconazole, itraconazolevoriconazole, voriconazoleketoconazole, ketoconazolefluconazole, fluconazolebias, biasclinmass, clinmassquantis, quantisnominal
