Migration of an HILIC Method for Released Glycan Analysis from the ACQUITY UPLC H- Class PLUS Bio System to the Arc Premier System

Význam tématu

V oblasti vývoje a výroby biopharmaceutik je nezbytné zajistit konzistentní výsledky chromatografických metod při přechodu mezi různými LC platformami. HILIC metody pro analýzu uvolněných glykánů umožňují citlivé mapování glykosylace, která ovlivňuje účinnost a bezpečnost terapeutických proteinů.

Cíle a přehled studie / článku

• Migrace existujícího HILIC postupu pro uvolněné glykany z ACQUITY UPLC H-Class PLUS Bio System na novou platformu Arc Premier System.
• Porovnání výkonu obou systémů z hlediska procentuální plošné biometrie a relativního retenčního času.
• Ověření přínosu technologie MaxPeak High Performance Surfaces u kovově citlivých analytů.

Použitá metodika a instrumentace

Studie využila Waters RapiFluor-MS Glycan Standard. Chromatografická separace byla provedena na kolóně XBridge Premier BEH Amide (4,6 × 150 mm), gradient byl škálován ze 35 na 51,4 minuty pro zachování lineární rychlosti proudu. Analýzu prováděly dva systémy: ACQUITY UPLC H-Class PLUS Bio System a Arc Premier System vybavený technologií MaxPeak High Performance Surfaces. Detekce byla založena na fluorescenčním signálu.

Hlavní výsledky a diskuse

Porovnání chromatogramů odhalilo, že rozdíly v procentuální ploše špiček mezi oběma platformami zůstaly v rozsahu do 2 % (u nízkokoncentrovaných glykánů do 0,1 %). Relativní retenční časy se lišily maximálně o ±2 sekundy, s RSD pod 1 % pro plošné procento a pod 0,1 % pro retenční časy. Nový Arc Premier System navíc prokázal až trojnásobné zlepšení zotavení silně sialylovaných glykanů díky minimalizaci kovových interakcí v kapilárním systému.

Přínosy a praktické využití metody

• Umožňuje hladkou a věrohodnou migraci HILIC metod mezi různými LC platformami bez kompromisů ve výkonu.
• Zvyšuje spolehlivost analýzy kovově citlivých analytů vlivem technologie MaxPeak HPS.
• Podporuje kontrolu kvality a charakterizaci glykosylace v životním cyklu biopharmaceutických produktů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Arc Premier System nabízí perspektivu širšího nasazení v analytickém a výrobním prostředí, zejména pro biomolekuly citlivé na kovové povrchy, jako jsou peptidy, glykoproteiny nebo oligonukleotidy. Další rozvoj lze očekávat v oblasti integrace s hmotnostní spektrometrií a automatizovanými platformami pro pokročilou datovou analýzu.

Závěr

Migrace HILIC metody pro analýzu uvolněných glykánů z ACQUITY UPLC H-Class PLUS Bio System na Arc Premier System potvrdila srovnatelný chromatografický výkon a významné zlepšení zotavení kovově citlivých složek. Arc Premier System se tak jeví jako vhodná a flexibilní volba pro podporu analytických potřeb v rámci vývoje a výroby biopharmaceutik.

Reference

• Lauber M. a kol. Low Adsorption HPLC Columns Based on MaxPeak High Performance Surfaces. Waters Application Note, 2021.
• Ippoliti S., Yu YQ, Chen W. Improved Recovery and Peak Shape of Sialylated O-glycopeptides of Erythropoietin (EPO) with ACQUITY Premier CSH Column. Waters Application Note, 2021.