Method Scaling from ACQUITY™ Premier to Arc™ Premier System
Technické články | 2023 | WatersInstrumentace
Peptidové mapování je klíčovou metodou pro charakterizaci monoklonálních protilátek a zajištění konzistence biotechnologických produktů. Při migraci metod mezi různými chromatografickými platformami hraje roli zachování separačního profilu a kvantitativní reprodukovatelnosti.
Studie ukazuje použití Waters Columns Calculator pro automatické škálování peptidové mapy infliximabu mezi systémem ACQUITY™ Premier (UPLC) a Arc™ Premier (UHPLC). Hodnotí se zachování selektivity, rovnováha hmoty a reprodukovatelnost retencí a ploch špiček.
Vzorek infliximabu byl redukován, alkylován, trypticky štěpen a připraven v mobilní fázi. Škálování gradientu vycházel z výpočtů sloupcových objemů a objemů mrtvého prostoru obou systémů. Jako detektory sloužily UV absorbance (214 nm) a ACQUITY™ QDa hmotnostní detektor.
Metoda škálovaná s „scale“ volbou prodloužila běh na ~120 min při zachování relativních retenčních časů (RRT < 0.02) a odchylek SD < 0.01 min. Při „custom“ režimu s flow 0,96 mL/min byl běh udržován na 80 min s obdobnou selektivitou. QDa detektor poskytl stabilní plošné odpovědi (% RSD < 5 %). MaxPeak HPS povrchy významně snížily špičkové protáčení, až o 60 %, a umožnily detekci nízce abundantních deamidovaných forem peptidu HC-T38.
Automatizované škálování metod urychluje transfer mezi laboratořemi a minimalizuje laboratorní ladění. Robustní povrchy HPS zvyšují spolehlivost detekce kovově citlivých peptidů a zabraňují adsorpci.
Očekává se širší aplikace automatického škálování v bioprodukci a QA/QC. Integrace pokročilých softwarových nástrojů s podporou AI pro optimalizaci gradientů a detekční profilace rozšíří možnosti vysokoprůtokových i vysokozátěžových analýz.
Metoda převedená ze systému ACQUITY™ Premier na Arc™ Premier zachovává selektivitu i kvantitativní přesnost. Waters Columns Calculator a MaxPeak HPS technologie společně zajišťují rychlou a robustní implementaci peptide mappingu v různých pracovních prostředích.
HPLC
ZaměřeníVýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Peptidové mapování je klíčovou metodou pro charakterizaci monoklonálních protilátek a zajištění konzistence biotechnologických produktů. Při migraci metod mezi různými chromatografickými platformami hraje roli zachování separačního profilu a kvantitativní reprodukovatelnosti.
Cíle a přehled studie
Studie ukazuje použití Waters Columns Calculator pro automatické škálování peptidové mapy infliximabu mezi systémem ACQUITY™ Premier (UPLC) a Arc™ Premier (UHPLC). Hodnotí se zachování selektivity, rovnováha hmoty a reprodukovatelnost retencí a ploch špiček.
Použitá metodika a instrumentace
Vzorek infliximabu byl redukován, alkylován, trypticky štěpen a připraven v mobilní fázi. Škálování gradientu vycházel z výpočtů sloupcových objemů a objemů mrtvého prostoru obou systémů. Jako detektory sloužily UV absorbance (214 nm) a ACQUITY™ QDa hmotnostní detektor.
Použitá instrumentace
- ACQUITY™ Premier UPLC System s TUV detektorem
- Arc™ Premier UHPLC System s TUV detektorem
- ACQUITY™ QDa Mass Detector
- QuanRecovery™ vials s MaxPeak™ HPS povrchy
- ACQUITY™ Premier Peptide CSH™ C18 kolona (1.7 µm, 2.1×100 mm)
- XSelect™ Premier Peptide CSH C18 kolona (2.5 µm, 4.6×100 mm)
- Empower™ 3 software
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda škálovaná s „scale“ volbou prodloužila běh na ~120 min při zachování relativních retenčních časů (RRT < 0.02) a odchylek SD < 0.01 min. Při „custom“ režimu s flow 0,96 mL/min byl běh udržován na 80 min s obdobnou selektivitou. QDa detektor poskytl stabilní plošné odpovědi (% RSD < 5 %). MaxPeak HPS povrchy významně snížily špičkové protáčení, až o 60 %, a umožnily detekci nízce abundantních deamidovaných forem peptidu HC-T38.
Přínosy a praktické využití metody
Automatizované škálování metod urychluje transfer mezi laboratořemi a minimalizuje laboratorní ladění. Robustní povrchy HPS zvyšují spolehlivost detekce kovově citlivých peptidů a zabraňují adsorpci.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se širší aplikace automatického škálování v bioprodukci a QA/QC. Integrace pokročilých softwarových nástrojů s podporou AI pro optimalizaci gradientů a detekční profilace rozšíří možnosti vysokoprůtokových i vysokozátěžových analýz.
Závěr
Metoda převedená ze systému ACQUITY™ Premier na Arc™ Premier zachovává selektivitu i kvantitativní přesnost. Waters Columns Calculator a MaxPeak HPS technologie společně zajišťují rychlou a robustní implementaci peptide mappingu v různých pracovních prostředích.
Reference
- R. E. Birdsall et al. Migration of an HILIC Method…Waters Application Note, 2021.
- K. DeLaney et al. Improving Peptide Mapping Studies…Waters Application Note, 2022.
- P. Bigos et al. Obtaining Equivalent IEX Performance…Waters Application Note, 2022.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Improving Chromatographic Separations Of Biopharmaceuticals With MaxPeak High Performance Surfaces (HPS) Technology
2023|Waters|Brožury a specifikace
Improving Chromatographic Separations Of Biopharmaceuticals With MaxPeak High Performance Surfaces (HPS) Technology Analytical Solutions Using MaxPeak High Performance Surfaces (HPS) Technology for Biopharmaceutical Therapeutics Biopharmaceutical therapeutics have consistently been the fastest growing segment within the pharmaceutical space and require advances…
Klíčová slova
premier, premieracquity, acquityglycan, glycanmaxpeak, maxpeaknucleotide, nucleotideculture, culturehps, hpspeptide, peptideintact, intactsystem, systembioaccord, bioaccordread, readcolumn, columnprotein, proteinglycans
Migrating Methods from the ACQUITY™ UPLC™ “Classic” System to the ACQUITY Premier System (FL)
2023|Waters|Aplikace
Application Note Migrating Methods from the ACQUITY™ UPLC™ “Classic” System to the ACQUITY Premier System (FL) Robert E. Birdsall, Kellen DeLaney, Pawel Bigos, Tatyana Friedman Waters Corporation Abstract Identifying improvement opportunities in pharmaceutical product lifecycle management is recommended as a…
Klíčová slova
acquity, acquityclassic, classicmigrating, migratingpremier, premieruplc, uplcsystem, systemmethods, methodsfrom, fromhps, hpsmaxpeak, maxpeaklifecycle, lifecycletailing, tailingaspartic, asparticlegacy, legacycontinually
Obtaining Equivalent IEX Chromatographic Performance Through Automated Method Scaling Using Waters Column Calculator
2022|Waters|Technické články
English United States | Application Note Obtaining Equivalent IEX Chromatographic Performance Through Automated Method Scaling Using Waters™ Column Calculator Pawel Bigos, Robert E. Birdsall, Ying Qing Yu Waters Corporation Abstract As upstream workflows are developed and refined, associated analytical methods…
Klíčová slova
iex, iexcalculator, calculatorscaling, scalingobtaining, obtainingwaters, watersequivalent, equivalentbioresolve, bioresolvepremier, premierchromatographic, chromatographicautomated, automatedperformance, performancethrough, throughmethod, methodcolumn, columnusing
The Arc Premier System (BSM-R) as a Flexible LC Platform for Peptide Mapping Assays
2022|Waters|Aplikace
Application Note The Arc Premier System (BSM-R) as a Flexible LC Platform for Peptide Mapping Assays Robert E. Birdsall, Ying Qing Yu Waters Corporation This is an Application Brief and does not contain a detailed Experimental section. Abstract Peptide mapping…
Klíčová slova
premier, premierbsm, bsmarc, arcmapping, mappingassays, assaysplatform, platformflexible, flexiblepeptide, peptidedeployed, deployedacross, acrosssystem, systembinary, binarymanager, managermanufacturing, manufacturingdelivering
