mAb Titer Determination in 60 Seconds Using the Agilent Bio‑Monolith rProtein A Column

Význam tématu

Determinace titru monoklonálních protilátek (mAb) je zásadní pro rychlý výběr klonů a optimalizaci bioprocesů v biotechnologickém i farmaceutickém výzkumu.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit výkonnost nového affinitního separačního sloupce Agilent Bio-Monolith rProtein A při maximálním průtoku a porovnat ji s nativním Protein A sloupcem. Studie zahrnovala test linearity, retence, přenos vzorku a zotavení mAb.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorky: hrubý supernatant CHO buněk s koncentrací 1 mg/mL rekombinantní IgG mAb.
• Reagencie: HPLC-čisté pufry (50 mM fosfát pH 7.4, 100 mM kyselina citronová pH 2.6).
• Instrumentace: Agilent 1290 Infinity II Bio LC (pumpa G7132A, autosampler G7137A s chlazením, multikolonní termostat G7116B, DAD detektor G7117B).
• Sloupce: Agilent Bio-Monolith rProtein A (4.95×5.2 mm, p/n 5190-6903) a Bio-Monolith Protein A (4.95×5.2 mm, p/n 5069-3639).
• Podmínky: gradient 0–0.2 min vazba, 0.3–0.65 min eluace (100 % B), průtok 3 mL/min, teplota 25 °C, detekce UV 280 nm, objem injekce 4–50 µL.

Hlavní výsledky a diskuse

• Ultrarychlý běh 1 min: retence mAb ~0.61 min, oddělení od nečistot (~0.05 min) s průtokem až 60 vzorků/h.
• Lineární odpověď kalibrační křivky s R2 = 0.9993 pro 5–60 µg injektované mAb.
• Minimální odchylky měřeného titru (–2.35 % až +2.53 %).
• Bridging studie: srovnatelné retence, tvar píku, linearita a zotavení mezi rProtein A a nativním sloupcem.
• Ověřena nepřítomnost carryover po injekci pufru.

Přínosy a praktické využití metody

Díky velmi krátkému čase analýzy a vysokému průtoku je metoda ideální pro screening klonů, vývoj a optimalizaci výrobních procesů a lze ji integrovat do pokročilých 2D-LC workflow.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření použití rProtein A sloupců pro různé formáty protilátek, vyšší automatizaci a on-line monitorování titru v reálném čase v procesní výrobě.

Závěr

Agilent Bio-Monolith rProtein A sloupec při maximálním průtoku 3 mL/min poskytuje robustní, reprodukovatelné a rychlé stanovení titru mAb s výkonem na úrovni nativního Protein A sloupce.

Reference

• Agilent Technologies Application Note 5994-3969EN (2021)