VYUŽITÍ KAPILÁRNÍ ZÓNOVÉ ELEKTROFORÉZY PRO ANALYTICKÉ HODNOCENÍ OPIOVÉ TINKTURY

Význam tématu

Opiová tinktura je tradiční farmaceutický přípravek obsahující směs morfinu, kodeinu, thebainu a papaverinu. Přesný kvantitativní rozbor těchto alkaloidů je klíčový pro zajištění kvality a bezpečnosti léčby. Moderní farmakopeje preferují HPLC, která však vyžaduje náročnou předúpravu vzorku. Kapilární zónová elektroforéza (CZE) představuje alternativu s minimální přípravou a vysokou separační účinností.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem práce bylo ověřit využitelnost CZE pro přímé stanovení čtyř hlavních opiových alkaloidů v reálné tinktuře bez složité extrakce. Studie se zaměřila na optimalizaci elektrolytického systému modifikovaného cyklodextriny: neionogenním β-CD, di-metylovaným β-CD a anionogenním karboxymethyl-β-CD (CM-β-CD).

Použitá metodika a instrumentace

Analytická měření probíhala za následujících podmínek:

• Kapilára: křemenná, 75 µm vnitřní průměr, 60 cm k detektoru (77 cm celková délka)
• BGE: 30 mM asparagové kyseliny / 30 mM β-alaninu, pH 3,7
• Přísady do BGE: β-CD (2–10 mM), diMe-β-CD (2–10 mM), CM-β-CD (2–10 mM)
• EzTA (elektroosmotický tok): 30 mM thiomočoviny
• Detekce: UV 280 nm
• Teplota: 30 °C, tlakové dávkování 1 000 Pa/6 s, napětí 25 kV

Použitá instrumentace

• Crystal CE systém ATI Unicam (Velká Británie)
• UV detektor Unicam 4225

Hlavní výsledky a diskuse

Elektroforetická pohyblivost všech čtyř alkaloidů závisela silně na pH a na typu cyklodextrinu:

• Bez přísad se morfin, kodein a thebain jevily téměř totožné mobility, papaverin byl výrazně pomalejší.
• Přidání β-CD vedlo k mírnému zpomalení, ale diferenciace nebyla dostatečná pro úplnou separaci.
• DiMe-β-CD zvýraznilo rozdíl mezi morfinem a kodeinem, avšak kodein a thebain zůstaly částečně překryté.
• Nejsilnější separační efekt vykázal anionogenní CM-β-CD. Při koncentraci 5 mM v BGE pH 3,7 byly všechny čtyři alkaloidy dobře oddělené s ostrými a symetrickými píky.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda CZE s CM-β-CD nabízí řadu výhod:

• Minimalizaci předúpravy vzorku – oddělení ve vodném roztoku bez organické extrakce.
• Vysokou separační účinnost a zkrácený analytický čas.
• Možnost simultánního stanovení více alkaloidů v jednom běhu.
• Snížení spotřeby bylinných odvarů, organic solvents a chemikálií.

Budoucí trendy a možnosti využití

Vývoj v oblasti CZE se bude soustředit na:

• Integraci s hmotnostní spektrometrií pro zvýšení selektivity a senzitivity.
• Vývoj nových cyklodextrinových derivátů a selektivních přísad pro složitější biologické matice.
• Automatizované mikrofluidní čipy pro kapilární elektroforézu v point-of-care diagnostice.
• Software pro rychlou optimalizaci separačních parametrů pomocí strojového učení.

Závěr

CZE modifikovaná CM-β-CD se ukázala jako efektivní, rychlá a ekonomická alternativa k HPLC pro kvantitativní stanovení hlavních opiových alkaloidů v opiové tinktuře. Optimální separační podmínky byly dosaženy při pH 3,7 s 5 mM CM-β-CD, což umožňuje přímé měření bez náročné předúpravy.

Reference

1. Lexicon chymico-pharmaceuticum, Johanis Helfrici Jungken, 1. vyd. 400 (1709)
2. Anleitung zur Untersuchung der Apotheken..., Wenzel W. Streinz, str. 489 (1825)
3. Výklad ku Farmakopoei rakouské, August Bělohoubek, str. 329 (1906)
4. Československý lékopis 3, Academia, str. 1179 (1970)
5. Deutsches Arzneibuch 10, sv. 3, Deutscher Apotheker Verlag (1996)
6. Weinberger R., Lurie I. S.: Anal. Chem. 63, 823 (1991)
7. Jelínek I., Gaš B., Zusková I., Niklíčková E., Bubnová I.: Utilization of CZE for analytical evaluation of Tinctura Opii (1997)