VYUŽITÍ KAPILÁRNÍ ELEKTROFORÉZY PRO ANALÝZU EFEDRINU A PSEUDOEFEDRENU V DOPLŇCÍCH VÝŽIVY

Význam tématu

Detekce efedrinu a pseudoefedrinu v potravinových doplňcích je klíčová pro prevenci neúmyslného dopingu a zajištění bezpečnosti sportovců.
Obě látky, odvozené z rostlinných extraktů Ephedra sinica, stimulují centrální nervový systém, zlepšují ventilaci plic a oddalují svalovou únavu, proto spadají mezi zakázané látky.

Cíle a přehled studie / článku

Studie se zabývá optimalizací separace efedrinu a pseudoefedrinu kapilární elektroforézou a aplikací vyvinuté metodiky na 19 komerčních přípravků pro sportovce.
Hlavní cíle:

• Navrhnout selektivní a citlivou metodiku stanovení obou alkaloidů.
• Vyhodnotit vhodnost různých nosných elektrolytů a pH.
• Ověřit výkon metody na reálných vzorcích doplňků výživy.

Použitá instrumentace

Elektroforetický systém Crystal CE od ATI Unicam (UK) vybavený UV detektorem Unicam 4225.
Kapilára: křemenná s polyimidovým potahem, vnitřní průměr 75 μm, celková délka 61 cm (41 cm do detektoru).
Teplota termostatu 30 °C; separační napětí 25 kV; detekce UV při 200 nm; tlakové vstřikování vzorku 20 mbar po dobu 6 s.

Použitá metodika

Nosné elektrolyty sestávaly z pěti systémů (pH 2,9–6,0) s kombinací aminokyselin nebo aminů a diMe-(3)-p-cyklodextrinu (0–10 mmol·l⁻¹).
Standardy efedrinu a pseudoefedrinu připraveny jako zásobní roztoky 0,5 mg·ml⁻¹ v deionizované vodě; kalibrační roztoky 0,05–0,5 mg·ml⁻¹.
Vzorky doplňků (cca 40 mg) extrahovány v ultrazvukové lázni 5 mM HCl po dobu 5 minut, následně filtrovány a dávkovány.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace ukázala, že nejvyšší rozlišení diastereoizomerů dosáhneme v nosném elektrolytu pH 3,6 s 5 mM diMe-(3)-CD.
Kalibrace v rozmezí 0,05–0,5 mg·ml⁻¹ byla lineární (R² > 0,998); meze detekce: efedrin 1,2·10⁻³ mg·ml⁻¹, pseudoefedrin 1,6·10⁻³ mg·ml⁻¹.
Recovey testy pro chloridy dosáhly 97±3 % (efedrin) a 94±3 % (pseudoefedrin); pro volné báze ~92 %.
Ze 19 analyzovaných vzorků bylo u 6 zjištěno přítomno efedrinu a pseudoefedrinu v koncentracích 3,5–11,9 mg·g⁻¹ pro efedrin a 0,6–7,8 mg·g⁻¹ pro pseudoefedrin.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí rychlou a citlivou analýzu s minimální předúpravou, nízkými náklady a vysokou selektivitou.
Je vhodná pro rutinní kontrolu sportovních doplňků v laboratořích QA/QC a pro dopingovou prevenci.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné směry dalšího vývoje:

• Chirální separace enantiomerů s využitím modifikovaných cyklodextrinů.
• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro zvýšení selektivity a citlivosti.
• Automatizace a vysokoprůchodové screeningové systémy pro rozsáhlé kontroly.

Závěr

Kapilární elektroforéza optimalizovaná pro pH 3,6 s 5 mM diMe-(3)-CD se ukázala jako efektivní a spolehlivý postup pro stanovení efedrinu a pseudoefedrinu v potravinových doplňcích.
Metoda poskytuje dostatečnou citlivost, linearitu a reprodukovatelnost pro rutinní laboratoř.

Reference

1. Lékařská komise MOV: Seznam dopingových tříd a metod. Lausanne, 1993.
2. Hurlbut J. A., Carr J. R., Singleton E. R., Faul K. C., Madson M. R., Storey J. M., Thomas T. L.: J. AOAC Int. 81 (1998) 1060.
3. Gurley B. J., Wang P., Gardner S. F.: J. Pharm. Sci. 87 (1998) 1547.
4. Lurie I. S., Odeneal N. G., McKibben T. D., Casale J. F.: Electrophoresis 19 (1998) 2918.
5. Scarcella D., Tagliaro F., Turrina S., Manetto G., Nakahara Y., Smith F. P., Marigo M.: Forensic Sci. Int. 89 (1997) 33.
6. Issaq H. J.: Electrophoresis 18 (1997) 2438.