Ultrafast Method for Simultaneous Measurement of Triazole Antifungals in Human Serum Using Online SPE/MS/MS
Aplikace | 2014 | Agilent TechnologiesInstrumentace
Přesná a rychlá kvantifikace triazolových antifungálních látek v lidské séru je klíčová pro terapeutické monitorování a farmakokinetické studie. Tradiční HPLC a LC/MS/MS metody jsou často časově náročné a spotřebují velké objemy rozpouštědel. Ultrafast SPE/MS/MS postup nabízí výrazné zkrácení doby analýzy a efektivní použití prostředků.
Vyvinout robustní online SPE/MS/MS metodu s ultrarychlou in-line extrakcí a kvantifikací pěti triazolových antifung (voriconazol, ketokonazol, flukonazol, itrakonazol, posakonazol) v lidské séru. Metoda má umožnit vysokou propustnost (>240 vzorků/h), spolehlivost a minimalizaci rozpouštědel oproti tradičním metodám.
Proteinová precipitace s acetonitrilem následované 10× ředěním v 2 % roztoku amonného hydroxidu. Online SPE pomocí Agilent RapidFire 365 s reverzní C18 cartridgem (G9205A) a Agilent 6460 Triple Quadrupole MS ve čtyřech RF stavech. Mobilní fáze: 10 mM amonný acetát/0,1 % kyseliny mravenčí/0,01 % TFA (pumpa 1) a čistý methanol (pumpy 2 a 3). Ionizace ESI+ a MRM monitorování kvantifikátorových a kvalifikátorových iontů. Software: MassHunter Triple Quadrupole Acquisition, Qualitative Analysis, Quantitative Analysis a RapidFire Acquisition.
Ultrafast SPE/MS/MS metoda dosahuje rychlosti 14 s/vzorek (>240 vzorků/h). Lineární rozsah 0,2–25 µg/mL se R2 > 0,995 pro všechny analyty. Intraday a interday přesnost do ±10 % a variabilita (CV) < 10 %. Carryover < 5 % potvrzeno na slepém vzorku. Robustnost demonstrovala stabilní odezvu přes ≥ 2000 po sobě jdoucích injekcí s CV 2,3–6,9 %.
Rozšíření panelu sledovaných látek, připojení k plně automatizovaným pracovním postupům, vývoj multiplexních testů pro širší spektrum léčiv, integrace s laboratorními informačními systémy, optimalizace pro mikroobjemy biologických vzorků.
Navržená ultrarychlá online SPE/MS/MS metoda nabízí přesné, robustní a velmi rychlé stanovení pěti triazolových antifung v lidské séru. Díky vysoké propustnosti a úsporám na spotřebě rozpouštědel představuje efektivní alternativu k tradičním HPLC a LC/MS/MS metodám pro klinické a výzkumné aplikace.
Příprava vzorků, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceAgilent Technologies
Souhrn
Význam tématu
Přesná a rychlá kvantifikace triazolových antifungálních látek v lidské séru je klíčová pro terapeutické monitorování a farmakokinetické studie. Tradiční HPLC a LC/MS/MS metody jsou často časově náročné a spotřebují velké objemy rozpouštědel. Ultrafast SPE/MS/MS postup nabízí výrazné zkrácení doby analýzy a efektivní použití prostředků.
Cíle a přehled studie / článku
Vyvinout robustní online SPE/MS/MS metodu s ultrarychlou in-line extrakcí a kvantifikací pěti triazolových antifung (voriconazol, ketokonazol, flukonazol, itrakonazol, posakonazol) v lidské séru. Metoda má umožnit vysokou propustnost (>240 vzorků/h), spolehlivost a minimalizaci rozpouštědel oproti tradičním metodám.
Použitá metodika a instrumentace
Proteinová precipitace s acetonitrilem následované 10× ředěním v 2 % roztoku amonného hydroxidu. Online SPE pomocí Agilent RapidFire 365 s reverzní C18 cartridgem (G9205A) a Agilent 6460 Triple Quadrupole MS ve čtyřech RF stavech. Mobilní fáze: 10 mM amonný acetát/0,1 % kyseliny mravenčí/0,01 % TFA (pumpa 1) a čistý methanol (pumpy 2 a 3). Ionizace ESI+ a MRM monitorování kvantifikátorových a kvalifikátorových iontů. Software: MassHunter Triple Quadrupole Acquisition, Qualitative Analysis, Quantitative Analysis a RapidFire Acquisition.
Hlavní výsledky a diskuse
Ultrafast SPE/MS/MS metoda dosahuje rychlosti 14 s/vzorek (>240 vzorků/h). Lineární rozsah 0,2–25 µg/mL se R2 > 0,995 pro všechny analyty. Intraday a interday přesnost do ±10 % a variabilita (CV) < 10 %. Carryover < 5 % potvrzeno na slepém vzorku. Robustnost demonstrovala stabilní odezvu přes ≥ 2000 po sobě jdoucích injekcí s CV 2,3–6,9 %.
Přínosy a praktické využití metody
- Více než 10násobné zkrácení času analýzy a snížení spotřeby rozpouštědel.
- Vysoká propustnost usnadňuje klinickou praxi a farmakokinetické studie.
- Jednoduchá příprava vzorků vhodná pro rutinní i výzkumné laboratoře.
Budoucí trendy a možnosti využití
Rozšíření panelu sledovaných látek, připojení k plně automatizovaným pracovním postupům, vývoj multiplexních testů pro širší spektrum léčiv, integrace s laboratorními informačními systémy, optimalizace pro mikroobjemy biologických vzorků.
Závěr
Navržená ultrarychlá online SPE/MS/MS metoda nabízí přesné, robustní a velmi rychlé stanovení pěti triazolových antifung v lidské séru. Díky vysoké propustnosti a úsporám na spotřebě rozpouštědel představuje efektivní alternativu k tradičním HPLC a LC/MS/MS metodám pro klinické a výzkumné aplikace.
Reference
- Verdier, M.-C.; et al. Clin. Chem. Lab. Med. 2010, 48(10), 1515–1522.
- Czasopismo, B.; et al. Clinica Chimica Acta 2012, 413, 240–245.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Rapid and Sensitive Analysis of Antifungal Agents in Human Serum Using the Agilent 6475 LC/TQ
2025|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Clinical Research Rapid and Sensitive Analysis of Antifungal Agents in Human Serum Using the Agilent 6475 LC/TQ Author Udi Jumhawan Agilent Technologies, Inc. Abstract A rapid, 3.5-minute, sensitive measurement of eight antifungal agents (5-fluorocytosine, fluconazole, hydroxy-itraconazole, isavuconazole, itraconazole,…
Klíčová slova
positive, positiverelative, relativeitraconazole, itraconazoleresponses, responsesantifungal, antifungalisavuconazole, isavuconazoleposaconazole, posaconazoleketoconazole, ketoconazolefluconazole, fluconazoleagents, agentsvoriconazole, voriconazolerecipe, recipeconcentration, concentrationhydroxy, hydroxytdm
Quantification of nine antimycotic drugs in human plasma or serum by LC-HRAM(MS) for clinical research
2021|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 73904 Quantification of nine antimycotic drugs in human plasma or serum by LC-HRAM(MS) for clinical research Authors: Claudio De Nardi1, Katharina Kern2, Steffen Peters2 Thermo Fisher Scientific GmbH, Dreieich, Germany 2 RECIPE Chemicals + Instruments GmbH, Munich, Germany…
Klíčová slova
itraconazole, itraconazolecalculated, calculatedanidulafungin, anidulafunginconcentration, concentrationaverage, averageisavuconazole, isavuconazoleposaconazole, posaconazoleantimycotic, antimycoticvoriconazole, voriconazolebias, biasketoconazole, ketoconazolefluconazole, fluconazoleantimycotics, antimycoticsnominal, nominalclinmass
Quantification of eleven antimycotics in human serum by TurboFlow chromatography coupled to high-resolution accurate-mass Orbitrap mass spectrometry for clinical research
2019|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE No. 73187 Quantification of eleven antimycotics in human serum by TurboFlow chromatography coupled to high-resolution accurate-mass Orbitrap mass spectrometry for clinical research Authors: Claudio De Nardi1, Carina Schuster², Michael Vogeser² ¹Thermo Fisher Scientific GmbH, Dreieich, Germany; ²Institute of…
Klíčová slova
anidulafungin, anidulafungincalibrator, calibratorvoriconazole, voriconazoleantimycotics, antimycoticslloq, lloqitraconazole, itraconazolemicafungin, micafunginamphotericin, amphotericinimprecision, imprecisioninaccuracy, inaccuracyitz, itzturboflow, turboflowanalytes, analytesmass, massistd
Quantification of eight antimycotics in human plasma using an Orbitrap Exploris 120 high-resolution accurate mass mass spectrometer for clinical research
2021|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 66064 Quantification of eight antimycotics in human plasma using an Orbitrap Exploris 120 high-resolution accurate mass mass spectrometer for clinical research Authors: Gaëtan Renoulin1, Claudio De Nardi2 Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, France 1 Thermo Fisher Scientific, Reinach,…
Klíčová slova
level, levelitraconazole, itraconazoleantimycotics, antimycoticsisavuconazole, isavuconazoleposaconazole, posaconazolevoriconazole, voriconazoleketoconazole, ketoconazolefluconazole, fluconazoleclinmass, clinmassaverage, averagearb, arbcalculated, calculatedname, nameconcentration, concentrationeight
