Impact of Reversed-Phase Chiral Chromatography on the LC-MS Analysis of Drugs in Biological Fluids

Význam tématu

Chirální analyty se v biologických vzorcích vyskytují ve formě enantiomerů, které mohou mít odlišné farmakologické a toxikologické vlastnosti. Spolehlivá a citlivá chromatografická separace enantiomerů je proto klíčová pro farmakokinetické, klinické a toxikologické studie.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a porovnat chirální chromatografické metody pro analýzu ketorolacu a skupiny β-blokátorů za použití reverzní a normální fáze a následně je aplikovat na LC-MS detekci v biologických tekutinách.

Použitá metodika a instrumentace

• Chirální stacionární fáze: amylosová (Kromasil AmyCoat) pro normální fázi a makrocyklické glykopeptidové CSP (CHIROBIOTIC TAG, CHIROBIOTIC T) pro reverzní fázi.
• LC-UV: Waters Alliance 2690 s UV detektorem (220–254 nm).
• LC-MS: Waters/Micromass ZQ (Single Quadrupole, ESI+), Agilent 1200RR s 6210 TOF (ESI+).
• Mobilní fáze: NP – heptan/2-propanol s TEA/TFA; RP – voda/methanol s 20 mM acetátem amonným nebo 0,1 % kyselinou mravenčí.
• Příprava vzorku pro plasmu: HybridSPE deproteinace s 1 % formiátovaným acetonitrilem.

Hlavní výsledky a diskuse

• Normální fáze na Kromasil AmyCoat selektivně rozlišila ketorolac, ale TEA a TFA silně potlačovaly MS signál a bez nich nepřišlo k eluci analyzů.
• Reverzní fáze na CHIROBIOTIC TAG s 0,1 % formic acid ve vodě/metanolu umožnila přímý přechod na LC-MS se značně zlepšeným ESI+ signálem.
• Beta-blokátory (alprenolol, metoprolol, clenbuterol, pindolol, salbutamol) extrahované HybridSPE z plazmy byly na CSP CHIROBIOTIC T rozděleny s vysokou selektivitou a citlivostí v ESI+ modus při 15 mM formiátu amonném v metanolu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje snadnou konverzi chirálních separací z LC-UV do LC-MS režimu s minimální reoptimací pro farmaceutické a klinické aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší nasazení kombinace makrocyklických CSP s vysokorozlišovacími MS systémy (TOF, Orbitrap) a miniaturizovanými kapilárními chromatografiemi. Perspektivní je také plně automatizovaná předúprava vzorků (SPE, microextraction) pro vysokou propustnost analýz.

Závěr

Reverzní fáze s makrocyklickými glykopeptidovými CSP poskytuje citlivé a selektivní chirální LC-MS metody pro analýzu léčiv a jejich metabolitů v biologických matricích, čímž zvyšuje efektivitu farmakokinetických a toxikologických studií.

Reference

1. K. R. Ing-Lorenzini et al., Journal of Chromatography A 1216 (2009) 3851
2. D. S. Bell et al., Chiral LC-MS Analysis of Drug Substances (Beta-Blockers) from Plasma Using Macrocyclic Glycopeptide Chiral Stationary Phases, Pittcon 2009