Basics of Chiral HPLC

Význam tématu

Chirální chromatografie hraje klíčovou roli při separaci enantiomerů v oblasti farmacie, biochemie, potravinářství a životního prostředí. Správná identifikace a kvantifikace chirálních složek je nezbytná pro zajištění účinnosti, bezpečnosti a kvality chirálních sloučenin.

Cíle a přehled studie / článku

Článek shrnuje základní principy chiralní HPLC, definuje stereochemické pojmy, popisuje mechanismy separace a přehled dostupných chiralních stacionárních fází CSP. Dále uvádí klíčové mobilní fáze, metodiku výběru CSP a optimalizaci mobilní fáze pro různé třídy chirálních látek.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda zahrnuje režimy normal phase, reversed phase, polar organic a polar ionic chromatography. Použité CSP zahrnují celulózové a amylozové deriváty Chiralcel Chiralpak, cyklodextriny CYCLOBOND I 2000 a deriváty, makrocyklické glykopeptidy CHIROBIOTIC V T R TAG. Mobilní fáze sestávají z organických rozpouštědel a pufrů či kyselin a bází v definovaných poměrech. Detekce byla prováděna UV VIS detektory, ELSD a LC MS MS.

Hlavní výsledky a diskuse

Mechanismy separace zahrnují inkluzní komplexaci, π–π interakce, vodíkové vazby, sterické přístupy, dipól–dipól a iontové interakce. Ilustrační příklady ukazují separaci pozičních, strukturálních, geometrických isomerů, enantiomerů a diastereomerů. Optimální složení mobilní fáze a teplotní řízení významně ovlivňují selektivitu a retenci. Polar ionic mode na makrocyklických glykopeptidech poskytuje rychlé a efektivní oddělení ionizovatelných chirálních látek.

Přínosy a praktické využití metody

Generic screening CSP zkracuje dobu vývoje metod a zvyšuje pravděpodobnost úspěšného rozlišení chirálních látek. Metoda je využitelná v QA QC pro stanovení diastereočistoty a enantiomerické čistoty, při přípravné purifikaci i v LC MS aplikacích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj nových derivátů CSP V2 T2, optimalizace mobilních fází pro MS kompatibilitu, integrované automatizované screeningové systémy a aplikace strojového učení při návrhu metod. Zvýšený důraz na ekologické solventy a preparativní chirální separace.

Závěr

Chiralní HPLC nabízí široké spektrum nástrojů pro separaci enantiomerů. Kombinace různých CSP a mobilních fází generuje vysokou úspěšnost separací. Polar ionic mode a moderní makrocyklické CSP výrazně rozšiřují aplikační oblast a zefektivňují vývoj metod.

Reference

• Armstrong DW Tang Y Chen S et al Anal Chem 1994 66(9) 1473-1484
• Cahn RJ Ingold C Prelog V J Chem Soc 1952 612
• Armstrong DW Zhou Y Anal Chem 2001 73(10) 2238-2245