Using Gradient SmartStart Technology and an ACQUITY UPLC H-Class System to Emulate an Agilent 1100 Series LC System Separation for Impurity Testing

Význam tématu

Transferring analytických gradientních LC metod mezi různými přístroji naráží na rozdílné objemy mezi mixérem a kolonou, což ovlivňuje dobu dosažení gradientu a kvalitu separace. Spolehlivá kompenzace tohoto efektu je klíčová zejména v QA/QC farmaceutické praxe při testování impurit API.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo převést metodu na analýzu klorazepinu a jeho impurit z Agilent 1100 Series LC System na ACQUITY UPLC H-Class System pomocí softwarové kompenzace Gradient SmartStart a hodnotit výkonnost oproti Agilent 1290 Infinity LC System.

Použitá metodika a instrumentace

Analytická podstata metody:

• Vzorek: USP clozapine resolution standard (400 µg/mL v metanol:voda 80:20)
• Kolona: ZORBAX Eclipse XDB C18, 4,6×150 mm, 3,5 µm, 30 °C s předhřevem
• Gradient: 5–30 % B/5 min, 30–95 % B/4 min; A=0,1 % formiová kyselina ve vodě, B=0,1 % formiová kyselina v acetonitrilu
• Průtok 1,5 mL/min, injekce 5 µL, detekce UV 254 nm

Kompenzace dwell volume:

• Měření objemů dead volume: Agilent 1100 – 1,290 mL, ACQUITY UPLC H-Class – 0,375 mL
• Nastavení post-injekčního zpoždění o 0,915 mL pomocí funkce Gradient SmartStart

Použitá instrumentace:

• Agilent 1100 Series LC System s DAD detektorem
• Agilent 1290 Infinity Quaternary LC System s DAD detektorem
• ACQUITY UPLC H-Class System s CH-A kolonním ohřívačem a UPLC PDA detektorem
• Software Empower 3 FR2

Hlavní výsledky a diskuse

Původní transfer bez úprav způsobil posuny retenčních časů 0,45–0,62 min (4–9 %), což překračovalo akceptovanou odchylku 3 %. Po aplikaci Gradient SmartStart se rozdíly snížily pod 0,05 min (<1 %) a relativní retenční časy se plně shodovaly s hodnotami na Agilent 1100. Nižší dispersní zóna UPLC systému navíc zvýšila USP rozlišení o 4–8 % bez změny kvantitativních výsledků impurit.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchá kompenzace gradient delay mezi platformami bez manuálních úprav gradientních tabulek
• Zachování retenčních charakteristik a systémové suitability metody
• Rychlejší validace a nasazení metod v QA/QC farmaceutických laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další automatizace kompenzace chromatografických parametrů ve software
• Integrace dead volume dat do cloudových řešení pro sdílení a správu metod
• Rozšíření principu na jiné separační techniky, jako kapilární elektroforézu

Závěr

Gradient SmartStart znacně usnadňuje vyrovnání rozdílů v dwell volume a umožňuje precizní přenos gradientních LC metod. ACQUITY UPLC H-Class System s touto funkcí reprodukuje původní separaci na HPLC systémech a nabízí navíc lepší rozlišení.

Reference

1. Protocol for Gradient Delay Measurement, Waters Corporation, 2013
2. Snyder LR et al., Introduction to Modern Chromatography, John Wiley & Sons, 2009
3. USP 37-NF 32, Chapter 621 Chromatography, 2014
4. Agilent Application Note, Easy Transfer of HPLC Methods, 2006