An Introduction to the Capabilities of Microscale 2D-RP/RP Peptide Chromatography with an ACQUITY UPLC M-Class System
Aplikace | 2014 | WatersInstrumentace
Metoda mikroskopické dvoudimenzionální reversní chromatografie (2D-RP/RP) nabízí vysokou separační kapacitu pro peptidové směsi při malém objemu vzorku a je zásadní v proteomice a QC bioterapeutik.
Studie si klade za cíl ukázat výkon, rozlišovací schopnost a reprodukovatelnost 2D-RP/RP na systému ACQUITY UPLC M-Class se sloupcem 300 μm ID. Použito bylo pětikrokové frakcionování při vysokém pH a následná gradientní separace.
Chromatografické uspořádání zahrnovalo:
Ve druhé dimenzi byla naměřena průměrná kapacita 277 peaků (10 % výšky). Kombinovaná teoretická kapacita obou dimenzí dosahuje ~1385. Reprodukovatelnost retencí 15 peptidů vykázala standardní odchylku ≤0,11 min z šesti opakování. V testu životnosti (>100 cyklů) zůstala variabilita peak capacity ≤5 % a střední tlak systému se pohyboval mezi 9500 a 11100 psi.
Vysoká separační kapacita a robustnost systému umožňují spolehlivou analýzu komplexních peptidových směsí v proteomice, detekci stopových host cell proteinů v bioterapeutikách i dalších náročných analytických úlohách.
Metoda má potenciál pro další miniaturizaci, integraci s dalšími dimenzemi (např. iontově-výměnná chromatografie), coupling s pokročilou hmotnostní spektrometrií a využití umělé inteligence pro zpracování komplexních dat.
2D-RP/RP na systému ACQUITY UPLC M-Class s 300 μm sloupci prokázala vysokou rozlišovací schopnost, reprodukovatelnost a odolnost při dlouhodobém provozu, což ji předurčuje k analýze náročných peptidových vzorků.
2D-LC
ZaměřeníProteomika
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Metoda mikroskopické dvoudimenzionální reversní chromatografie (2D-RP/RP) nabízí vysokou separační kapacitu pro peptidové směsi při malém objemu vzorku a je zásadní v proteomice a QC bioterapeutik.
Cíle a přehled studie
Studie si klade za cíl ukázat výkon, rozlišovací schopnost a reprodukovatelnost 2D-RP/RP na systému ACQUITY UPLC M-Class se sloupcem 300 μm ID. Použito bylo pětikrokové frakcionování při vysokém pH a následná gradientní separace.
Použitá metodika a instrumentace
Chromatografické uspořádání zahrnovalo:
- ACQUITY UPLC M-Class System pracující při tlaku ≥10 000 psi a průtoku 8 μL/min
- První dimenze: XBridge BEH300 C18, 1,0×50 mm, 5 μm, pH 10
- Druhá dimenze: ACQUITY UPLC M-Class HSS T3 C18, 300 μm×150 mm, 1,8 μm
- Vzorková smíšenina: 400 fmol MassPREP Digestion Standard Mix 1 (tryptický digest)
- Detekce: ESI-MS na SYNAPT G2-S s mikrosondou, rozlišení ~20 000
Hlavní výsledky a diskuse
Ve druhé dimenzi byla naměřena průměrná kapacita 277 peaků (10 % výšky). Kombinovaná teoretická kapacita obou dimenzí dosahuje ~1385. Reprodukovatelnost retencí 15 peptidů vykázala standardní odchylku ≤0,11 min z šesti opakování. V testu životnosti (>100 cyklů) zůstala variabilita peak capacity ≤5 % a střední tlak systému se pohyboval mezi 9500 a 11100 psi.
Přínosy a praktické využití metody
Vysoká separační kapacita a robustnost systému umožňují spolehlivou analýzu komplexních peptidových směsí v proteomice, detekci stopových host cell proteinů v bioterapeutikách i dalších náročných analytických úlohách.
Budoucí trendy a možnosti využití
Metoda má potenciál pro další miniaturizaci, integraci s dalšími dimenzemi (např. iontově-výměnná chromatografie), coupling s pokročilou hmotnostní spektrometrií a využití umělé inteligence pro zpracování komplexních dat.
Závěr
2D-RP/RP na systému ACQUITY UPLC M-Class s 300 μm sloupci prokázala vysokou rozlišovací schopnost, reprodukovatelnost a odolnost při dlouhodobém provozu, což ji předurčuje k analýze náročných peptidových vzorků.
Reference
- Lauber MA, Koza SM, Fountain KJ. An Introduction to the Capabilities of Microscale 2D-RP/RP Peptide Chromatography with an ACQUITY UPLC M-Class System. Waters Corporation; 2014.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Evaluating 2D-RP/RP Fractionation Capabilities of the ACQUITY UPLC M-Class System with 300-μm I.D. Configuration
2015|Waters|Aplikace
Evaluating 2D-RP/RP Fractionation Capabilities of the ACQUITY UPLC M-Class System with 300-µm I.D. Configuration Catalin E. Doneanu, Asish Chakraborty, Patricia Young and Weibin Chen Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B…
Klíčová slova
enl, enlpeptide, peptideuplc, uplcacquity, acquitypho, phoadh, adhhcps, hcpsgnptvevelttek, gnptvevelttekvnqigtlsesik, vnqigtlsesiknvndviapafvk, nvndviapafvkclass, classcell, cellmin, mindimer, dimerbsa
Advancing Host Cell Protein Analyses Through the Combined Use of Microscale 2D RP/RP with CSH C18 and Ion Mobility Enabled MS Detection
2014|Waters|Aplikace
Advancing Host Cell Protein Analyses Through the Combined Use of Microscale 2D RP/RP with CSH C18 and Ion Mobility Enabled MS Detection Matthew A. Lauber, Catalin E. Doneanu, Stephan M. Koza, Weibin Chen, and Kenneth J. Fountain Waters Corporation, Milford,…
Klíčová slova
uplc, uplcmicroscale, microscaleacquity, acquityplgs, plgsprotein, proteinmab, mabasm, asmhcp, hcpclass, classdigest, digesttvm, tvmprecursor, precursorhost, hosthcps, hcpsuniprot
Assay for Identification and Quantification of Host Cell Protein Impurities in High-Purity Monoclonal Antibodies Down to 1 ppm: An Inter-Laboratory Study
2015|Waters|Aplikace
Assay for Identification and Quantification of Host Cell Protein Impurities in High-Purity Monoclonal Antibodies Down to 1 ppm: An Inter-Laboratory Study Catalin E. Doneanu, Malcolm Anderson, Brad J. Williams, Matthew A. Lauber, Asish Chakraborty, and Weibin Chen Waters Corporation, Milford,…
Klíčová slova
hcp, hcphcps, hcpsmobility, mobilitypeptide, peptideenergy, energyspectrum, spectrumseparation, separationhdms, hdmsprecursor, precursorfragmentation, fragmentationconfirmatory, confirmatorymobilogram, mobilogramplgs, plgsprotein, proteincell
Optimizing Peak Capacity in Nanoscale Trap-Elute Peptide Separations with Differential Column Heating
2014|Waters|Aplikace
Optimizing Peak Capacity in Nanoscale Trap-Elute Peptide Separations with Differential Column Heating Matthew A. Lauber, Stephan M. Koza, and Kenneth J. Fountain Waters Corporation, 34 Maple Street, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N…
Klíčová slova
nanoscale, nanoscaleelute, elutepeptide, peptidetrapping, trappingtrap, trapdifferential, differentialbsm, bsmtvm, tvmcapacity, capacityheating, heatingseparations, separationscolumn, columnoptimizing, optimizinguplc, uplcacquity
