Waters UPLC AND UPLC/MS APPLICATION Notebook
Příručky | 2009 | WatersInstrumentace
Moderní laboratoře v oblasti farmacie, biotechnologií a potravinářství čelí rostoucím požadavkům na rychlost, citlivost a kvalitu chromatografických a hmotnostně spektrometrických analýz. Zvyšuje se tlak na vyšší produktivitu, snížení spotřeby organických rozpouštědel, minimalizaci opakovaných analýz a rychlou validaci procesních postupů a metod.
Notebook UPLC/MS aplikací představuje široké portfolio případových studií, jejichž cílem je ukázat:
Analýzy jsou realizovány na systémech UltraPerformance LC v kombinaci s hmotovými spektrometry Xevo TQ MS a SYNAPT HDMS. Využity jsou sub-2µm částice v kolonkách ACQUITY UPLC BEH C18, HSS T3 či specifických nano kolonkách pro 2D RP/RP rozdělení při vysokém a nízkém pH. Pro kvantitativní metody je nasazeno MRM získané z Quanpedia databáze, pro proteomiku ApexTrack integrace, pro přípravu vzorků DisQuE QuEChERS a pro on-line monitoring PATROL UPLC Process Analyzer s integrovaným softwarem IntelliStart a QCMonitor.
Porovnání fast LC metod ukázalo, že ACQUITY UPLC dosahuje až 43 % vyšší peak capacity a výrazně užší šířky píků než systémy modifikovaného HPLC či UHPLC. Systémová disperze a gradientní zpoždění u konkurence kompromitují kvalitu oddělení zejména na 2.1 mm I.D. kolonkách.
System-to-system reprodukovatelnost pro peptidové mapování prokázala mezisystémovou RSD retencí pod 0.2 min a plošek pod 6 %, zaručující konzistentní identifikaci i relativní kvantifikaci PTM.
Online 2D RP/RP separace tryptických peptidů z bakteriálního digestu přinesla >86 % unikátních peptide a téměř identickou proteomickou pokryvnost s offline 5-frakčním režimem. Heart-cut metoda zrychlila cílenou analýzu save čas až 4×.
Pesticidní screening plnil limity LOQ na úrovni 24 ng / mL proti evropským nařízením, simultánně detekoval 17 klíčových reziduí a potvrdil platnost metody podle SANCO doporučení.
Online monitorování čištění výrobních reaktorů sledovalo zbytky výchozí látky i cílového produktu v reálném čase. Výsledky UPLC Process Analyzeru plně odpovídaly off-line měření swabů a zbytkových roztoků, umožnily úsporu rozpouštědel a snížení downtime.
Další rozvoj UPLC/MS technologií směřuje k miniaturizaci nano-LC platform, hlubší integraci PAT nástrojů a umělé inteligenci pro automatickou optimalizaci metod. Cílené heart-cut chromatografie v reálném čase, rozšíření zelené analytiky a on-line aplikace v regulačních procesech slibují další racionalizaci provozních nákladů a zrychlení rozhodování.
ACQUITY UPLC ve spojení s Xevo MS systémy představuje vysoce výkonnou platformu pro široké spektrum analytických úloh od farmaceutických reakcí, proteomiky až po potravinářský screening. Nabízí nejvyšší chromatografickou účinnost, odolnou reprodukovatelnost, výrazné úspory rozpouštědel a plnou kompatibilitu s GMP a regulacemi, čímž optimalizuje výkonnost a náklady moderních laboratoří.
HPLC, LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ, 2D-LC
ZaměřeníPotraviny a zemědělství, Farmaceutická analýza, Proteomika
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Moderní laboratoře v oblasti farmacie, biotechnologií a potravinářství čelí rostoucím požadavkům na rychlost, citlivost a kvalitu chromatografických a hmotnostně spektrometrických analýz. Zvyšuje se tlak na vyšší produktivitu, snížení spotřeby organických rozpouštědel, minimalizaci opakovaných analýz a rychlou validaci procesních postupů a metod.
Cíle a přehled studie
Notebook UPLC/MS aplikací představuje široké portfolio případových studií, jejichž cílem je ukázat:
- Porovnání výkonnosti ACQUITY UPLC technologie s upravenými HPLC a UHPLC systémy
- Reprodukovatelnost sub-2µm separací a vysokoúčinné mapování peptidů
- Online 2D chromatografii pro proteomické aplikace a cílené heart-cut analýzy
- Citlivou detekci reziduí pesticidů splňující přísné hygienické limity
- Real-time monitorování účinnosti čištění výrobního zařízení pomocí UPLC
Použitá metodika a instrumentace
Analýzy jsou realizovány na systémech UltraPerformance LC v kombinaci s hmotovými spektrometry Xevo TQ MS a SYNAPT HDMS. Využity jsou sub-2µm částice v kolonkách ACQUITY UPLC BEH C18, HSS T3 či specifických nano kolonkách pro 2D RP/RP rozdělení při vysokém a nízkém pH. Pro kvantitativní metody je nasazeno MRM získané z Quanpedia databáze, pro proteomiku ApexTrack integrace, pro přípravu vzorků DisQuE QuEChERS a pro on-line monitoring PATROL UPLC Process Analyzer s integrovaným softwarem IntelliStart a QCMonitor.
Hlavní výsledky a diskuse
Porovnání fast LC metod ukázalo, že ACQUITY UPLC dosahuje až 43 % vyšší peak capacity a výrazně užší šířky píků než systémy modifikovaného HPLC či UHPLC. Systémová disperze a gradientní zpoždění u konkurence kompromitují kvalitu oddělení zejména na 2.1 mm I.D. kolonkách.
System-to-system reprodukovatelnost pro peptidové mapování prokázala mezisystémovou RSD retencí pod 0.2 min a plošek pod 6 %, zaručující konzistentní identifikaci i relativní kvantifikaci PTM.
Online 2D RP/RP separace tryptických peptidů z bakteriálního digestu přinesla >86 % unikátních peptide a téměř identickou proteomickou pokryvnost s offline 5-frakčním režimem. Heart-cut metoda zrychlila cílenou analýzu save čas až 4×.
Pesticidní screening plnil limity LOQ na úrovni 24 ng / mL proti evropským nařízením, simultánně detekoval 17 klíčových reziduí a potvrdil platnost metody podle SANCO doporučení.
Online monitorování čištění výrobních reaktorů sledovalo zbytky výchozí látky i cílového produktu v reálném čase. Výsledky UPLC Process Analyzeru plně odpovídaly off-line měření swabů a zbytkových roztoků, umožnily úsporu rozpouštědel a snížení downtime.
Přínosy a praktické využití metody
- Krátké doby analýzy (1–2 minuty pro běžné i online kontroly)
- Nižší spotřeba organických rozpouštědel (až 95 % úspora oproti HPLC)
- Zvýšení laboratorní propustnosti a eliminace opakovaných běhů
- Automatizovaná QC kontrola pomocí QCMonitor a TrendPlot
- Podpora validace čištění a PAT implementace ve výrobě
- Bezpečné metody splňující legislativní požadavky
Budoucí trendy a možnosti využití
Další rozvoj UPLC/MS technologií směřuje k miniaturizaci nano-LC platform, hlubší integraci PAT nástrojů a umělé inteligenci pro automatickou optimalizaci metod. Cílené heart-cut chromatografie v reálném čase, rozšíření zelené analytiky a on-line aplikace v regulačních procesech slibují další racionalizaci provozních nákladů a zrychlení rozhodování.
Závěr
ACQUITY UPLC ve spojení s Xevo MS systémy představuje vysoce výkonnou platformu pro široké spektrum analytických úloh od farmaceutických reakcí, proteomiky až po potravinářský screening. Nabízí nejvyšší chromatografickou účinnost, odolnou reprodukovatelnost, výrazné úspory rozpouštědel a plnou kompatibilitu s GMP a regulacemi, čímž optimalizuje výkonnost a náklady moderních laboratoří.
Reference
- Comparison of a Fast HPLC Method across Multiple LC Systems, Waters Application Note 720003164EN
- Comparison of a UPLC Method across Multiple UHPLC Systems, Waters Application Note 720003166EN
- UPLC System-to-System Reproducibility for Peptide Mapping, Waters Application Note 720003175EN
- Method for Heart-Cut Analysis Using nanoACQUITY UPLC with 2D Technology, Waters Application Note 720003174EN
- Pesticide Residues in Baby Food, Waters Application Note 720002812EN
- Online UPLC Method for Cleaning Validation, Waters Application Note 720002993EN
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Online UPLC Method for the Support of Cleaning Validation and the Routine Monitoring of Cleaning Procedures
2014|Waters|Aplikace
Online UPLC Method for the Support of Cleaning Validation and the Routine Monitoring of Cleaning Procedures Tanya Tollifson Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B E N E F I T…
Klíčová slova
online, onlinecleaning, cleaningpatrol, patroluplc, uplcoffline, offlinemonitoring, monitoringprocess, processclean, cleanroutine, routineprocedures, proceduresvalidation, validationsupport, supportequipment, equipmentworst, worststarting
Online Monitoring of Process Column Effluents in Purification by UPLC
2014|Waters|Aplikace
Online Monitoring of Process Column Effluents in Purification by UPLC Tanya Tollifson Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B E N E F I T S INT RODUC T ION The…
Klíčová slova
process, processpatrol, patroluplc, uplcphenacetin, phenacetinapi, apisalicylic, salicylicpurification, purificationeffluents, effluentsonline, onlinereal, realmonitoring, monitoringatline, atlineminutes, minutescolumn, columnanalysis
Application Solutions for Biopharmaceuticals - A Focus on Protein Therapeutics
2012|Waters|Příručky
ApplicAtion SolutionS for BiophArmAceuticAlS A Focus on Protein Therapeutics Introduction: Key Challenges in Biopharmaceutical Characterization .............................................................................................5 7 PROTEIN mass aNalysIs comprehensive and routine characterization of proteins and peptides by lc/mS and lc/mS e ...............................................................9 characterization of an igG1 monoclonal Antibody…
Klíčová slova
uplc, uplcpeptide, peptideprotein, proteinwaters, watersacquity, acquityglycan, glycanantibody, antibodymass, massglycans, glycanspeptides, peptidessystem, systemanalysis, analysismapping, mappingintact, intactbiopharmalynx
Small Scale Peptide and Impurity Isolation Using the ACQUITY UPLC H-Class and Waters Fraction Manager-Analytical Systems
2015|Waters|Aplikace
Small Scale Peptide and Impurity Isolation Using the ACQUITY UPLC H-Class and Waters Fraction Manager-Analytical Systems Jo-Ann M. Jablonski and Andrew J. Aubin Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B E…
Klíčová slova
uplc, uplcacquity, acquityfraction, fractionclass, classpeptide, peptidemanager, managerwaters, waterswfm, wfmisolation, isolationimpurity, impurityanalytical, analyticalscale, scalesystems, systemssynthetic, syntheticeluting
