Waters UPLC AND UPLC/MS APPLICATION Notebook
Příručky | 2009 | WatersInstrumentace
Moderní laboratoře v oblasti farmacie, biotechnologií a potravinářství čelí rostoucím požadavkům na rychlost, citlivost a kvalitu chromatografických a hmotnostně spektrometrických analýz. Zvyšuje se tlak na vyšší produktivitu, snížení spotřeby organických rozpouštědel, minimalizaci opakovaných analýz a rychlou validaci procesních postupů a metod.
Notebook UPLC/MS aplikací představuje široké portfolio případových studií, jejichž cílem je ukázat:
Analýzy jsou realizovány na systémech UltraPerformance LC v kombinaci s hmotovými spektrometry Xevo TQ MS a SYNAPT HDMS. Využity jsou sub-2µm částice v kolonkách ACQUITY UPLC BEH C18, HSS T3 či specifických nano kolonkách pro 2D RP/RP rozdělení při vysokém a nízkém pH. Pro kvantitativní metody je nasazeno MRM získané z Quanpedia databáze, pro proteomiku ApexTrack integrace, pro přípravu vzorků DisQuE QuEChERS a pro on-line monitoring PATROL UPLC Process Analyzer s integrovaným softwarem IntelliStart a QCMonitor.
Porovnání fast LC metod ukázalo, že ACQUITY UPLC dosahuje až 43 % vyšší peak capacity a výrazně užší šířky píků než systémy modifikovaného HPLC či UHPLC. Systémová disperze a gradientní zpoždění u konkurence kompromitují kvalitu oddělení zejména na 2.1 mm I.D. kolonkách.
System-to-system reprodukovatelnost pro peptidové mapování prokázala mezisystémovou RSD retencí pod 0.2 min a plošek pod 6 %, zaručující konzistentní identifikaci i relativní kvantifikaci PTM.
Online 2D RP/RP separace tryptických peptidů z bakteriálního digestu přinesla >86 % unikátních peptide a téměř identickou proteomickou pokryvnost s offline 5-frakčním režimem. Heart-cut metoda zrychlila cílenou analýzu save čas až 4×.
Pesticidní screening plnil limity LOQ na úrovni 24 ng / mL proti evropským nařízením, simultánně detekoval 17 klíčových reziduí a potvrdil platnost metody podle SANCO doporučení.
Online monitorování čištění výrobních reaktorů sledovalo zbytky výchozí látky i cílového produktu v reálném čase. Výsledky UPLC Process Analyzeru plně odpovídaly off-line měření swabů a zbytkových roztoků, umožnily úsporu rozpouštědel a snížení downtime.
Další rozvoj UPLC/MS technologií směřuje k miniaturizaci nano-LC platform, hlubší integraci PAT nástrojů a umělé inteligenci pro automatickou optimalizaci metod. Cílené heart-cut chromatografie v reálném čase, rozšíření zelené analytiky a on-line aplikace v regulačních procesech slibují další racionalizaci provozních nákladů a zrychlení rozhodování.
ACQUITY UPLC ve spojení s Xevo MS systémy představuje vysoce výkonnou platformu pro široké spektrum analytických úloh od farmaceutických reakcí, proteomiky až po potravinářský screening. Nabízí nejvyšší chromatografickou účinnost, odolnou reprodukovatelnost, výrazné úspory rozpouštědel a plnou kompatibilitu s GMP a regulacemi, čímž optimalizuje výkonnost a náklady moderních laboratoří.
HPLC, LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ, 2D-LC
ZaměřeníPotraviny a zemědělství, Farmaceutická analýza, Proteomika
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Moderní laboratoře v oblasti farmacie, biotechnologií a potravinářství čelí rostoucím požadavkům na rychlost, citlivost a kvalitu chromatografických a hmotnostně spektrometrických analýz. Zvyšuje se tlak na vyšší produktivitu, snížení spotřeby organických rozpouštědel, minimalizaci opakovaných analýz a rychlou validaci procesních postupů a metod.
Cíle a přehled studie
Notebook UPLC/MS aplikací představuje široké portfolio případových studií, jejichž cílem je ukázat:
- Porovnání výkonnosti ACQUITY UPLC technologie s upravenými HPLC a UHPLC systémy
- Reprodukovatelnost sub-2µm separací a vysokoúčinné mapování peptidů
- Online 2D chromatografii pro proteomické aplikace a cílené heart-cut analýzy
- Citlivou detekci reziduí pesticidů splňující přísné hygienické limity
- Real-time monitorování účinnosti čištění výrobního zařízení pomocí UPLC
Použitá metodika a instrumentace
Analýzy jsou realizovány na systémech UltraPerformance LC v kombinaci s hmotovými spektrometry Xevo TQ MS a SYNAPT HDMS. Využity jsou sub-2µm částice v kolonkách ACQUITY UPLC BEH C18, HSS T3 či specifických nano kolonkách pro 2D RP/RP rozdělení při vysokém a nízkém pH. Pro kvantitativní metody je nasazeno MRM získané z Quanpedia databáze, pro proteomiku ApexTrack integrace, pro přípravu vzorků DisQuE QuEChERS a pro on-line monitoring PATROL UPLC Process Analyzer s integrovaným softwarem IntelliStart a QCMonitor.
Hlavní výsledky a diskuse
Porovnání fast LC metod ukázalo, že ACQUITY UPLC dosahuje až 43 % vyšší peak capacity a výrazně užší šířky píků než systémy modifikovaného HPLC či UHPLC. Systémová disperze a gradientní zpoždění u konkurence kompromitují kvalitu oddělení zejména na 2.1 mm I.D. kolonkách.
System-to-system reprodukovatelnost pro peptidové mapování prokázala mezisystémovou RSD retencí pod 0.2 min a plošek pod 6 %, zaručující konzistentní identifikaci i relativní kvantifikaci PTM.
Online 2D RP/RP separace tryptických peptidů z bakteriálního digestu přinesla >86 % unikátních peptide a téměř identickou proteomickou pokryvnost s offline 5-frakčním režimem. Heart-cut metoda zrychlila cílenou analýzu save čas až 4×.
Pesticidní screening plnil limity LOQ na úrovni 24 ng / mL proti evropským nařízením, simultánně detekoval 17 klíčových reziduí a potvrdil platnost metody podle SANCO doporučení.
Online monitorování čištění výrobních reaktorů sledovalo zbytky výchozí látky i cílového produktu v reálném čase. Výsledky UPLC Process Analyzeru plně odpovídaly off-line měření swabů a zbytkových roztoků, umožnily úsporu rozpouštědel a snížení downtime.
Přínosy a praktické využití metody
- Krátké doby analýzy (1–2 minuty pro běžné i online kontroly)
- Nižší spotřeba organických rozpouštědel (až 95 % úspora oproti HPLC)
- Zvýšení laboratorní propustnosti a eliminace opakovaných běhů
- Automatizovaná QC kontrola pomocí QCMonitor a TrendPlot
- Podpora validace čištění a PAT implementace ve výrobě
- Bezpečné metody splňující legislativní požadavky
Budoucí trendy a možnosti využití
Další rozvoj UPLC/MS technologií směřuje k miniaturizaci nano-LC platform, hlubší integraci PAT nástrojů a umělé inteligenci pro automatickou optimalizaci metod. Cílené heart-cut chromatografie v reálném čase, rozšíření zelené analytiky a on-line aplikace v regulačních procesech slibují další racionalizaci provozních nákladů a zrychlení rozhodování.
Závěr
ACQUITY UPLC ve spojení s Xevo MS systémy představuje vysoce výkonnou platformu pro široké spektrum analytických úloh od farmaceutických reakcí, proteomiky až po potravinářský screening. Nabízí nejvyšší chromatografickou účinnost, odolnou reprodukovatelnost, výrazné úspory rozpouštědel a plnou kompatibilitu s GMP a regulacemi, čímž optimalizuje výkonnost a náklady moderních laboratoří.
Reference
- Comparison of a Fast HPLC Method across Multiple LC Systems, Waters Application Note 720003164EN
- Comparison of a UPLC Method across Multiple UHPLC Systems, Waters Application Note 720003166EN
- UPLC System-to-System Reproducibility for Peptide Mapping, Waters Application Note 720003175EN
- Method for Heart-Cut Analysis Using nanoACQUITY UPLC with 2D Technology, Waters Application Note 720003174EN
- Pesticide Residues in Baby Food, Waters Application Note 720002812EN
- Online UPLC Method for Cleaning Validation, Waters Application Note 720002993EN
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Online UPLC Method for the Support of Cleaning Validation and the Routine Monitoring of Cleaning Procedures
2014|Waters|Aplikace
Online UPLC Method for the Support of Cleaning Validation and the Routine Monitoring of Cleaning Procedures Tanya Tollifson Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B E N E F I T…
Klíčová slova
online, onlinecleaning, cleaningpatrol, patroluplc, uplcoffline, offlinemonitoring, monitoringprocess, processclean, cleanroutine, routineprocedures, proceduresvalidation, validationsupport, supportequipment, equipmentworst, worstfinal
Online Monitoring of Process Column Effluents in Purification by UPLC
2014|Waters|Aplikace
Online Monitoring of Process Column Effluents in Purification by UPLC Tanya Tollifson Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B E N E F I T S INT RODUC T ION The…
Klíčová slova
process, processpatrol, patroluplc, uplcphenacetin, phenacetinapi, apisalicylic, salicylicpurification, purificationeffluents, effluentsonline, onlinereal, realmonitoring, monitoringatline, atlinecolumn, columnanalysis, analysisminutes
Application Solutions for Biopharmaceuticals - A Focus on Protein Therapeutics
2012|Waters|Příručky
ApplicAtion SolutionS for BiophArmAceuticAlS A Focus on Protein Therapeutics Introduction: Key Challenges in Biopharmaceutical Characterization .............................................................................................5 7 PROTEIN mass aNalysIs comprehensive and routine characterization of proteins and peptides by lc/mS and lc/mS e ...............................................................9 characterization of an igG1 monoclonal Antibody…
Klíčová slova
uplc, uplcpeptide, peptideprotein, proteinwaters, watersacquity, acquityglycan, glycanantibody, antibodymass, massglycans, glycanspeptides, peptidessystem, systemanalysis, analysismapping, mappingintact, intactbiopharmalynx
Online Reaction Monitoring of In-Process Manufacturing Samples by UPLC
2014|Waters|Aplikace
Online Reaction Monitoring of In-Process Manufacturing Samples by UPLC Tanya Tollifson Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B E N E F I T S INT RODUC T ION Better throughput,…
Klíčová slova
process, processpatrol, patroluplc, uplcreaction, reactionstarting, startingapi, apimanufacturing, manufacturinginprocess, inprocessonline, onlinematerial, materialsystem, systemsensors, sensorsanalysis, analysisimpurity, impurityinitiation
