Peptide Mapping of Antibody Drugs by Nexera-i

Význam tématu

Peptidové mapování je klíčová metoda v zajištění kvality monoklonálních protilátek, umožňující ověření primární struktury a detekci možných mutací či modifikací.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat schopnosti integrovaného UHPLC systému Nexera-i ve spojení s malými částicemi a core-shell kolonkou Aeris PEPTIDE XB-C18 při analýze tryptického digestu lidské IgG. Studie hodnotila rozlišení peptidů a opakovatelnost retencí.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém: Shimadzu Nexera-i integrated UHPLC
• Kolona: Aeris 1.7 µm PEPTIDE XB-C18 100 Å (150 × 2.0 mm)
• Přepínač gradientu: nízkotlaký gradientový ventil Nexera-i
• Mixer 300 µl pro optimalizaci gradientu s TFA
• Detektor: LC-2040C 3D při 215 nm, high-speed high-sensitivity flow cell

Použitá metodika

Pro přípravu vzorku byla IgG redukována a alkylována, následoval 20hodinový tryptický digest při 37 °C. Chromatografie byla prováděna gradientem mobile fáze B od 0 % do 45 % během 90 min (0,5 %/min), následně až do 100 % ve 4 min. Průtok činil 0,2 ml/min, teplota kolony 60 °C, objem injekce 10 µl.

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatogram ukázal ostré a dobře oddělené peptidové píky z tryptického digestu IgG. Základní píky dosáhly intra-denní opakovatelnosti retencí s RSD nižší než 0,3 % a inter-denní opakovatelnosti pod 0,16 %. Nízkotlaký gradientový ventil a 300 µl mixer zajistily stabilní dodávku gradientu i při použití TFA.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoké rozlišení komplexních směsí peptidů
• Výjimečná opakovatelnost retencí pro porovnávání larev
• Možnost detekce jemných modifikací a mutací
• Vhodnost pro rutinní QA/QC kontrolu biologických léčiv

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj kolonek s optimalizovanou stacionární fází a vylepšení integrace UHPLC systémů se systémovou automatizací vzorků. AI-podpora vyhodnocení peptidových map a online monitoring stability protilátek otevírá nové možnosti v biovědeckém výzkumu i výrobní kontrole.

Závěr

Studie potvrdila, že Nexera-i s core-shell kolonkou Aeris poskytuje vynikající výkon při peptidovém mapování IgG. Metoda je vysoce spolehlivá, opakovatelná a vhodná pro rutinní analýzu biologických léčiv.