Analysis of Serum Cortisol, Androstenedione, and 17-hydroxyprogesterone Using 2D UPLC-MS/MS for Clinical Research

Význam tématu

Nízká invazivita a vysoká přesnost kvantitativní analýzy steroidních hormonů v séru jsou klíčové pro klinický výzkum a diagnostiku endokrinních onemocnění. 2D UPLC-MS/MS nabízí efektivní online čištění vzorků a dosahuje potřebné analytické citlivosti bez komplikované manuální přípravy.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo navrhnout a validovat konfiguraci systému 2D UPLC-MS/MS pro současné stanovení kortizolu, androstenedionu a 17-hydroxyprogesteronu v malém objemu séra (100 µL), přičemž se využívá jednoduché proteinové precipitace a minimalizuje zásah obsluhy.

Použitá metodika a instrumentace

Příprava vzorku:

• Proteino precipitace přidáním roztoku síranu zinečnatého a methanolu.
• Centrifugace při ~25 000 g po dobu 5 minut.

Instrumentace:

• ACQUITY UPLC I-Class se 2D technologií (trapping a backflush režim).
• Kolony: 1. dimenze ACQUITY UPLC BEH C18 SB VanGuard Pre-column; 2. dimenze ACQUITY UPLC HSS T3 Column.
• Detekce na Xevo TQD s ESI v kladném módu, MRM režim.

Hlavní výsledky a diskuse

Výkonnost metody:

• Kalibrační křivky s korelačními koeficienty r² > 0,99.
• Celková opakovatelnost ≤ 4,7 % CV napříč koncentracemi.
• Detekční limity: kortizol 1,9 nmol/L, androstenedion 0,16 nmol/L, 17-OHP 0,37 nmol/L (S/N > 10).
• Porovnání s UK NEQAS ALTM: Demingova regrese pro kortizol y=1,03x–2,66; androstenedion y=1,06x–0,04; 17-OHP y=0,99x–0,10, potvrzující vysokou shodu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé a spolehlivé stanovení klíčových steroidních hormonů z malého objemu séra. Zjednodušuje workflow klinických laboratoří, zvyšuje produktivitu a eliminuje nutnost ručních úprav systému mezi režimy analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozšíření panelu analyzovaných hormonů, plná automatizace přípravy vzorků a využití pokročilých přístupů strojového učení pro zpracování dat mohou dále zvýšit efektivitu a kvalitu výsledků.

Závěr

Vyvinutá 2D UPLC-MS/MS metoda splňuje požadavky na citlivost, přesnost a specifitu pro stanovení kortizolu, androstenedionu a 17-hydroxyprogesteronu v séru. Flexibilní konfigurace systému umožňuje snadný přechod na přímou UPLC-MS/MS analýzu bez mechanických úprav.

Reference

Wardle R., Calton L. Analysis of Serum Cortisol, Androstenedione, and 17-hydroxyprogesterone Using 2D UPLC-MS/MS for Clinical Research. Waters Corporation; 2017.