UPLC-MS/MS Analysis of Dihydrotestosterone, Dehydroepiandrosterone, Testosterone, Androstenedione, 17-Hydroxyprogesterone, and Progesterone in Serum for Clinical Research

Význam tématu

Steroidní hormony hrají klíčovou roli v regulaci pohlavních charakteristik, zánětlivých procesech a metabolických drahách. Tradiční imunotesty často čelí zkreslení v důsledku křížové reaktivity, zatímco UPLC-MS/MS poskytuje vynikající selektivitu, citlivost a přesnost při měření nízkých koncentrací hormonů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout automatizovanou metodiku pro kvantifikaci dihydrotestosteronu (DHT), dehydroepiandrosteronu (DHEA), testosteronu, androstenedionu, 17-hydroxyprogesteronu (17-OHP) a progesteronu v séru. Metoda kombinuje SPE extrakci pomocí Oasis MAX µElution destičky s UPLC-MS/MS analýzou a vyhodnocením přes EQA vzorky.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek (100 µl séra) je obohacen o stabilně značené interní standardy, chemicky srážen metanolem a extrahován na Oasis MAX µElution destičce za použití Tecan Freedom EVO 100/4 robotu. Chromatografie probíhá na ACQUITY UPLC I-Class FTN systému s CORTECS UPLC C18 1,6 µm kolonkou. Detekce se provádí v režimu MRM na hmotnostním spektrometru Xevo TQ-S micro. Data jsou řízena softwary MassLynx, TargetLynx a LIMS Interface.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou selektivitu bez interferencí z podobných steroidů nebo matrice. Limity detekce (<20 % RSD) dosahují 0,034 nmol/L pro DHT, 0,17 nmol/L pro DHEA, 0,007 nmol/L pro testosteron a obdobně nízkých hodnot pro ostatní analyty. Linearity r2 > 0,99 napříč klinickým rozsahem. Celková preciznost QC (<7 % RSD) a opakovatelnost (<4,5 % RSD) byly vynikající. Matrixové efekty byly kompenzovány interními standardy (normalizovaný faktor blízko 1). Porovnání s EQA vzorky (UK NEQAS, RCPAQAP) ukázalo průměrnou bias < 6 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Nízký objem vzorku (100 µl) a vysoká přesnost při sledování nízkých hladin hormonů.
• Automatizace extrakce zajišťuje vysokou propustnost a minimalizuje chyby obsluhy.
• Široké klinické a výzkumné uplatnění při sledování endokrinních parametrů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu sledovaných steroidů a metabolitů.
• Integrace do pokročilých LIMS a workflow pro personalizovanou medicínu.
• Miniaturizace a návrh multiplexních analýz pro zvýšení efektivity laboratorních procesů.

Závěr

Vyvinutá UPLC-MS/MS metoda umožňuje spolehlivou, citlivou a přesnou analýzu šesti klíčových steroidních hormonů v séru, přičemž automatizace extrakce zlepšuje propustnost a kvalitu dat. Výsledná metodika je vhodná pro klinický výzkum i kontrolu kvality v laboratořích.

Reference

• Foley D., Calton L. UPLC-MS/MS Analysis of Dihydrotestosterone, Dehydroepiandrosterone, Testosterone, Androstenedione, 17-Hydroxyprogesterone, and Progesterone in Serum for Clinical Research. Waters Corporation, 2019.