Waters ACQUITY UPLC H-Class Coupled with an ACQUITY QDa Detector to Provide a Highly Sensitive and Specific Solution for Cleaning Validation

Význam tématu

Cleaning validation je klíčovou součástí farmaceutické výroby a zajišťuje, že mezi výrobními šaržemi nedochází k nebezpečnému přenosu kontaminantů. Regulátoři vyžadují prokazatelné důkazy o účinnosti čistících postupů, zejména u látek s vysokou toxicitou či bez výrazné UV absorpce. Spojení UPLC s hmotnostní detekcí posouvá hranice citlivosti a spolehlivosti analýzy, čímž zkracuje dobu odstávek a snižuje riziko nevyhovujících výsledků.

Cíle a přehled studie

Cílem této aplikace bylo ověřit, že systém Waters ACQUITY UPLC H-Class v kombinaci s PDA detektorem a ACQUITY QDa hmotnostním detektorem umožňuje:

• senzitivní kvantifikaci stopových analytů až na úrovni pg
• konfirmaci identity slabě UV absorbujících či nechromatoforových sloučenin
• provoz v souladu s GMP požadavky prostřednictvím Empower 3 CDS

Použitá metodika a instrumentace

Analýza navázala na vzorky z odběru a extrakce z povrchu reaktorů. Vzorky pěti modelových látek (naphazolin HCl, lidokain HCl, amitriptylin HCl, loperamid HCl, tolazamid) byly přípraveny v rozmezí 0,01–1000 ng/ml a analyzovány pomocí rychlé 5minutové chromatografie. Empower 3 řídilo sběr dat z PDA a QDa. Gradient tvořily 2 mM formiát amonný s 0,1 % formiovou kyselinou (A) a acetonitril s 0,1 % formiovou kyselinou (B).

Použitá instrumentace:

• Waters ACQUITY UPLC H-Class System
• ACQUITY QDa Mass Detector (ESI, pozitivní režim)
• PDA detektor (220–400 nm)
• ACQUITY UPLC BEH C18 kolona 75×2,1 mm, 1,7 µm
• Empower 3 Chromatography Data Software

Hlavní výsledky a diskuse

SIR režim QDa umožnil detekci až na 0,005 ng/ml (LOD) a kvantifikaci od ~0,02 ng/ml (LOQ) pro lidokain HCl. Linearita dosáhla 5 řádů velikosti (0,01–1000 ng/ml) s R2 ≈0,997. Ostatní sloučeniny vykázaly obdobné LOQ v rozmezí 0,02–0,03 ng/ml, kromě amitriptylinu s LOQ ~0,6 ng/ml. Precision (RSD) se držela pod 11 % v celém rozsahu. Blank kontroly nepotvrdily nežádoucí přenos. PDA detekce poskytla LOD >20 ng/ml, což opět potvrdilo výhodu integrace hmotnostní detekce pro stopovou analýzu.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazně nižší limity detekce a kvantifikace ve srovnání s klasickým HPLC‐UV
• Možnost identifikace nechromatoforových sloučenin
• Snížení potřeby dodatečných testů při jejich potvrzení
• Kompletní správa dat v souladu s cGxP standardy
• Rychlé převzetí v rutinním provozu QC laboratoří

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat multi‐složkové screeningové metody v reálném čase, rozšíření pro vysokotoxické látky a automatizaci odběru povrchových vzorků. V kombinaci s pokročilou softwarovou správou by se systém mohl stát standardem pro validaci čištění v regulovaných provozech farmaceutického, biotechnologického či potravinářského průmyslu.

Závěr

Propojení UPLC PDA a ACQUITY QDa přináší robustní a citlivé řešení pro validaci čištění. Metodika nabízí spolehlivou kvantifikaci stopových množství, potvrzení identity látek a plnou kompatibilitu s GMP. To vše vede k rychlejšímu rozhodování, úspoře nákladů a vyšší úrovni datové integrity.

Reference

1. Walsh A. ISPE Cleaning Guide, přehled požadavků na čištění.
2. APIC. Cleaning Validation in API Manufacturing Plants, 1999.
3. McHale W. a kol. Výhody TOC vs. HPLC pro cleaning validation.
4. Harris R. Molecular Profiles, 2012.