Performance Assessment of the ACQUITY UPLC H-Class PLUS Binary System

Význam tématu

Optimalizace chromatografických metod spojuje požadavky na rychlost analýzy, citlivost, selektivitu a robustnost. UPLC systémy s nízkým objemem mrtvého prostoru a vysokotlakovým mícháním jsou klíčové pro zkrácení doby analýzy a udržení reprodukovatelnosti, zejména při náročných gradientních separacích.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo ověřit výkonnost systému ACQUITY UPLC H-Class PLUS Binary System při analýze směsi pěti farmaceuticky relevantních látek za použití Binary Solvent Manager PLUS a porovnat výsledky s Quaternary systémem. Studie se zaměřila na uvnitřdenní a mezidení reprodukovatelnost retencí a možnost přímého přenosu metody.

Použitá metodika

Byla připravena směs lidokainu HCl, nafazolinu HCl, amitriptylinu HCl, loperamidu HCl a tolazamidu v metanolové matrici (1 mg/ml) a následně na pracovní koncentraci 100 ng/ml v metanol-voda 50:50. Metoda používala gradient od 95 % fáze A (2 mM formiátu amonného/0,1 % kyseliny mravenčí) do 95 % fáze B (acetonitril/0,1 % kyseliny mravenčí) za 5 minut, průtok 0,5 ml/min a injekční objem 5 μl. Analýzy proběhly se a bez izokratického zdržení doporučeného Waters Column Calculator.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC H-Class PLUS Binary System se BSM PLUS
• ACQUITY UPLC H-Class PLUS Sample Manager – Flow Through Needle (SM-FTN)
• ACQUITY UPLC H-Class PLUS Quaternary System (komparace)
• Kolona ACQUITY UPLC BEH C18, 1,7 μm, 2,1×75 mm
• Detektor ACQUITY QDa v ESI pozitivním módu

Hlavní výsledky a diskuse

Retenční časy všech pěti sloučenin byly reprodukovatelné na dvě desetinná místa jak uvnitř dne, tak mezi dny. Bez izokratického zdržení byl oproti Quaternary systému zaznamenán pokles retencí o 24–31 %, zatímco s vypočítaným zdržním došlo k jejich mírnému nárůstu o 6,7–10,5 %. Data potvrdila konzistentní chromatogramy během čtyř testovaných dnů.

Přínosy a praktické využití metody

• Zkrácení doby analýzy z 5 minut na 3 minuty (40% úspora času)
• Zvýšení robustnosti a průchodnosti metod při vysokém tlaku a nízkém objemu mrtvého prostoru
• Jednodušší přenos metod mezi Quaternary a Binary systémy po korekci objemu předkolony

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s vysoce citlivými MS detektory pro komplexní analýzy
• Automatizace přenosu metod a optimalizace gradientů s pomocí softwaru a AI
• Rozšíření aplikací na biopolymerní a peptidové analýzy vyžadující jemné gradienty

Závěr

ACQUITY UPLC H-Class PLUS Binary System ukázal vynikající stabilitu a reprodukovatelnost retencí pěti testovaných sloučenin. Možnost zkrácení běhu analýzy a efektivní přenos metod na Binary systém představuje významný přínos pro routine QC, výzkum i průmyslové analýzy.

Reference

1. Henry C.; Wrona M.; Kirk J.; Ladd R. Waters ACQUITY UPLC H-Class Coupled with an ACQUITY QDa Detector to Provide a Highly Sensitive and Specific Solution for Cleaning Validation. Waters Application Note, 720005871EN (2016).