Development of a High Sensitivity, Sub-Picogram SPE LC-MS Method for Quantification of Mometasone from Human Plasma

Význam tématu

Mometason furoát je syntetický kortikosteroid s nízkou biologickou dostupností a velmi nízkými hladinami v plazmě po inhalační dávce. Přesná a citlivá kvantifikace v lidské plazmě je klíčová pro farmakokinetické studie a výzkum nových léčiv.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout robustní, rychlou a vysoce citlivou metodu SPE LC-MS/MS pro stanovení mometasonu furoátu v lidské plazmě s dolní hranicí kvantifikace 0,5 pg/mL a lineárním rozsahem 0,5–60 pg/mL.

Použitá metodika

• Vzorky plazmy (600 µL) byly obohaceny vnitřním standardem mometason furoát-d3 a denaturovány metanolem.
• Extrahovány byly pomocí Oasis HLB 1 cc kazet: kondicionování, ekvilibrace, naložení vzorku, promytí vodou a 20% metanolem, eluace směsí MTBE/DCM, vysušení a rekonstituce v metanol:voda (50:50).
• Obnovitelnost extrakce dosáhla přibližně 85 %.

Použitá instrumentace

• UPLC systém: ACQUITY UPLC I-Class FTN s kolonkou BEH Phenyl (1,7 µm, 2,1×100 mm) při 50 °C. Mobilní fáze: voda s 0,1 % kyseliny formiové a 5 mM formiátu amonného (A) a methanol (B), gradient 95 % A → 10 % A.
• MS detekce: Xevo TQ-XS tandemový kvadrupól s UniSpray ESI+, kapilární napětí 0,5 kV, teplota odplyňování 650 °C, plyny a MRM přechody 521,16→355,05 pro analyzát a 524,08→355,05 pro ISTD.
• Data zpracována softwarem MassLynx a TargetLynx.

Hlavní výsledky a diskuse

• Metoda dosáhla LLOQ 0,5 pg/mL s poměrem signálu k šumu ~19,7.
• Lineární kalibrační křivka v rozsahu 0,5–60 pg/mL s r2 >0,9959, přesnost 85–115 % a opakovatelnost (CV) <15 %.
• Výsledky QC vzorků ukázaly přesnost a preciznost pod 15 %, splňující doporučené bioanalytické požadavky.
• Chromatografická separace zajišťuje vynikající rozlišení od složek matrice.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje kvantifikaci extrémně nízkých koncentrací mometasonu v omezeném objemu vzorku, což je důležité pro farmakokinetiku, toxikologii a vývoj nových léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření postupu na jiné účinné látky s nízkými koncentracemi.
• Integrace vysokopropustných platforem pro hromadné zpracování vzorků.
• Další zdokonalování ionizačních zdrojů a sorbentů pro zvýšení citlivosti.

Závěr

Vyvinutá SPE LC-MS/MS metoda pro stanovení mometasonu furoátu v lidské plazmě je vysoce citlivá, selektivní a robustní, splňuje požadavky pro farmakokinetické a bioanalytické studie a je vhodná pro podporu vývoje léčiv.

Reference

• O’Neil MJ (2006) The Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals. 14th edn, Merck & Co. Inc., p.4244.
• Sweetman SC (2007) Martindale: The Complete Drug Reference. 35th edn, Pharmaceutical Press, London, p.925.
• Daley-Yates PT (2015) Inhaled Corticosteroids: Potency, Dose Equivalence and Therapeutic Index. Br J Clin Pharmacol, 80:372–380. doi:10.1111/bcp.12637.
• Srinivasarao K, Gorule V, Reddiah VC, Krishna VA (2018) Validated Method Development for Estimation of Formoterol Fumarate and Mometasone Furoate in Metered Dose Inhalation Form by HPLC.