UPLC-MS/MS Bioanalytical Quantification of Linaclotide from Plasma

Význam tématu

Peptidová terapie představuje rostoucí oblast s vysokou specifitou a potenciálem pro selektivní lékové zásahy. Linaklotid je 14-aminokyselinový cyklický peptid se třemi disulfidickými můstky, používaný k léčbě syndromu dráždivého tračníku s konstipací a chronické idiopatické zácpy. Nízké systémové koncentrace linaklotidu (<50 pg/mL) kladou vysoké nároky na citlivost a selektivitu analytických metod.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout selektivní, citlivou a robustní UPLC-MS/MS metodu pro kvantifikaci linaklotidu v lidské plazmě. Metoda kombinuje rychlou SPE extrakci, reverzní fázovou chromatografii a tandemovou kvadrupólovou hmotnostní spektrometrii s ESI zdrojem.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky (300 µL plazmy) se upravily přídavkem amonného octanu s amoniakem, extrahovaly na Oasis MAX µElution desce a eluovaly v kyselém organickém rozpouštědle. Chromatografie probíhala na HSS PFP kolonce při 42 °C s gradientem 0,2 % formiové kyseliny ve vodě a acetonitrilu. MS detekce využívala MRM přechod 764→182 m/z a optimalizované napětí a kolizní energii.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC I-Class System FTN
• ACQUITY UPLC HSS PFP Column, 1.7 µm, 2.1×100 mm
• Xevo TQ-XS Tandem Quadrupole Mass Spectrometer se zdrojem ESI+
• Oasis MAX 96-well µElution Plate

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje LLOQ 10 pg/mL se signál-šum poměrem >120. Kalibrační křivka byla lineární v rozsahu 10–4000 pg/mL (r2>0,997) s přesností 85–115 % a CV <15 %. QC vzorky vykázaly přesnost 97–110 % a opakovatelnost <8 % pro všechny úrovně koncentrací. Selektivita byla zvýšena kombinací mixed-mode SPE a reverzní fázové separace.

Přínosy a praktické využití metody

Tato bioanalytická metoda umožňuje spolehlivou farmakokinetickou a toxikokinetickou analýzu linaklotidu při velmi nízkých koncentracích. Rychlá příprava vzorků a krátká doba analýzy (<10 minut) podporují vysokoprůchodové zpracování sérií vzorků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření metodiky na další cyklické a stereoisomerické peptidy, vývoj pokročilých SPE sorbentů a mikrofluidních UPLC systémů může dále zdokonalit citlivost a selektivitu. Automatizace přípravy vzorků a integrace s high-resolution MS podpoří rychlejší validaci a rutinní implementaci.

Závěr

Vyvinutá UPLC-MS/MS metoda pro kvantifikaci linaklotidu v plazmě nabízí vynikající citlivost (LLOQ 10 pg/mL), lineární dynamický rozsah 10–4000 pg/mL a robustní analytické parametry. Metoda je fit-for-purpose pro podporu výzkumu a klinických farmakokinetických studií.

Reference

1. Busby RW, Kessler MM, Bartolini WP et al. Pharmacologic Properties, Metabolism, and Disposition of Linaclotide. J Pharmacol Exp Ther. 2013;344(1):196–206.
2. Zhu Y-S, Feng T, Diao Y-Q, Tu C-Y. Analysis and Preparation of Linaclotide by High Performance Liquid Chromatography. J Anal Bioanal Tech. 2017;8(3):366.
3. O’Neil MJ. The Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals. 14th ed. Merck & Co; 2006. p. 4244.
4. FDA. Bioanalytical Method Validation: Guidance for Industry. May 2018.