Performance of the ACQUITY UPLC I-Class PLUS System for Methods which Employ Long, Shallow Gradients

Význam tématu

Metody kapalné chromatografie s dlouhými a pozvolnými gradienty se uplatňují při analýze komplexních vzorků, například při mapování peptidů nebo analýze glykánů. Klíčovým požadavkem těchto postupů je vysoká reprodukovatelnost retenčních časů, která je nezbytná pro přesnou identifikaci a kvantifikaci analyzovaných složek.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit schopnost systému ACQUITY UPLC I-Class PLUS generovat vysoce opakovatelný gradient pro dlouhé a pozvolné změny složení mobilní fáze. Testy zahrnovaly:

• Opakovatelnost retenčních časů v sérii osmi opakovaných injekcí.
• Stabilitu relativních retenčních časů v průběhu 135 dnů na sedmi samostatných dnech.

Použitá metodika

Vzorek tvořil standard MassPREP Enolase Digestion Standard v 0,1% TFA ve vodě. Metoda byla navržena pro změnu organického podílu o 0,66 % na objem kolony, s počátečním zastudováním na 1 % organické fáze. Průtok nastaven na 0,2 mL/min, teplota kolony 65 °C, detekce při 214 nm.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC I-Class PLUS System (binary high-pressure pump)
• ACQUITY UPLC Peptide Column, BEH C18 130 Å, 1.7 µm, 2.1 × 100 mm
• ACQUITY UPLC TUV Detector
• Software Empower 3

Hlavní výsledky a diskuse

Opakované injekce ukázaly průměrnou odchylku retenčního času 0,013 min (0,78 s) pro 48 piků, což dokládá mimořádnou reprodukovatelnost gradientu. Během 135 dnů na sedmi různých dnech byl maximální směrodatný rozptyl relativních retenčních časů 0,004 min (0,24 s), což potvrzuje dlouhodobou stabilitu systému.

Přínosy a praktické využití metody

Díky konzistentnímu dodávání gradientu vysokotlakým systémem lze cestovat mezerami mezi analyty s minimálními posuny selektivity. To je klíčové pro aplikace jako peptide mapping, kde jsou kritické páry piků těsně oddělené.

Budoucí trendy a možnosti využití

Ve vývoji LC systémů lze očekávat další vylepšení v oblasti:

• Automatické diagnostiky a seřízení gradientů pomocí pokročilých softwarových nástrojů.
• Integrace s vysoce citlivou hmotnostní spektrometrií pro proteomické a glykomické studie.
• Využití strojového učení pro optimalizaci gradientů při analýze komplexních biologických vzorků.

Závěr

ACQUITY UPLC I-Class PLUS System prokázal výjimečnou schopnost generovat reprodukovatelné dlouhé a pozvolné gradienty, což umožňuje přesnou a spolehlivou analýzu komplexních peptidových směsí i na dlouhodobých časových škálách.

Reference

1. Swartz M, Krull I. Validation and Peptide Mapping. LCGC North America. 2007;25:468–475.
2. Lauber MA, Koza SM, Chambers EE. Comprehensive Characterization of the N and O-Linked Glycosylation of a Recombinant Human EPO. Waters Application Note. 2015.
3. Nikles S, Monschein H, Zou H, Liu Y, He X, Fan D, Lu A, Yu K, Isaac G, Bauer R. Metabolic Profiling of the Traditional Chinese Medicine Formulation Yu Ping Feng San. J Pharm Biomed Anal. 2017;145:219–229.