PEPTIDE MAPPING: BEST PRACTICES FOR GENERATING RELIABLE AND ROBUST LIQUID CHROMATOGRAPHY METHODS
Postery | 2018 | Waters | HPLC SymposiumInstrumentace
Vysoce robustní a reprodukovatelné chromatografické metody jsou nezbytné pro přesné rozlišení a kvantifikaci peptidů, zejména při metodách s dlouhými, mělkými gradienty, kde i malá změna složení mobilní fáze ovlivní výsledky.
Studie se zaměřila na porovnání spolehlivosti gradientového podání a stability retenčních časů při analýze enolázového peptidového standardu na systémech s vysokotlakou binární směsí versus nízkotlakou kvaternární směsí. Hlavním cílem bylo vyhodnotit intra- i interdenní variabilitu retence a dlouhodobou robustnost metody.
Metoda byla založena na UPLC s kolonkou Peptide BEH C18 1,7 µm (2,1×100 mm) při 65 °C a průtoku 0,2 mL/min.
Mobilní fáze A: 0,1 % TFA ve vodě
Mobilní fáze B: 0,1 % TFA v acetonitrilu
Gradient: 1→50 % B za 85 minut
Detekce UV při 214 nm
Instrumentace:
Binární vysokotlaké míchání zajistilo přibližně trojnásobně nižší standardní odchylku retenčních časů (RT SD) intra-denně ve srovnání s kvaternárním systémem.
Meziosobní sledování relativních retenčních časů vybraných peptidů v průběhu 136 dní ukázalo extrémně nízké odchylky (0,000–0,002 min), což demonstruje dlouhodobou stabilitu gradientu a konzistentní výkon systému.
Grafické překrytí chromatogramů pro osm injekcí během jednoho dne a tabulka rel. retenčních časů pro různé dny potvrzují výjimečnou reprodukovatelnost.
Robustní podání gradientu výrazně minimalizuje odchylky retence, což je klíčové pro:
Očekává se širší aplikace vysokotlakých binárních systémů v proteomice a biofarmaceutické kvalitě, integrace s automatizovanými přípravami vzorků a softwarovými nástroji pro prediktivní řízení gradientu a kontroly kvality v reálném čase.
Volba chromatografického designu má zásadní vliv na spolehlivost a reprodukovatelnost LC metod. Vysokotlaké binární míchání poskytuje stabilní a konzistentní gradient pro náročné peptide mapping aplikace.
HPLC
ZaměřeníProteomika
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Vysoce robustní a reprodukovatelné chromatografické metody jsou nezbytné pro přesné rozlišení a kvantifikaci peptidů, zejména při metodách s dlouhými, mělkými gradienty, kde i malá změna složení mobilní fáze ovlivní výsledky.
Cíle a přehled studie / článku
Studie se zaměřila na porovnání spolehlivosti gradientového podání a stability retenčních časů při analýze enolázového peptidového standardu na systémech s vysokotlakou binární směsí versus nízkotlakou kvaternární směsí. Hlavním cílem bylo vyhodnotit intra- i interdenní variabilitu retence a dlouhodobou robustnost metody.
Použitá metodika a instrumentace
Metoda byla založena na UPLC s kolonkou Peptide BEH C18 1,7 µm (2,1×100 mm) při 65 °C a průtoku 0,2 mL/min.
Mobilní fáze A: 0,1 % TFA ve vodě
Mobilní fáze B: 0,1 % TFA v acetonitrilu
Gradient: 1→50 % B za 85 minut
Detekce UV při 214 nm
Instrumentace:
- Systém Waters ACQUITY UPLC I-Class PLUS s binárním vysokotlakým mícháním
- Srovnávací systém se kvaternárním nízkotlakým mícháním
Hlavní výsledky a diskuse
Binární vysokotlaké míchání zajistilo přibližně trojnásobně nižší standardní odchylku retenčních časů (RT SD) intra-denně ve srovnání s kvaternárním systémem.
Meziosobní sledování relativních retenčních časů vybraných peptidů v průběhu 136 dní ukázalo extrémně nízké odchylky (0,000–0,002 min), což demonstruje dlouhodobou stabilitu gradientu a konzistentní výkon systému.
Grafické překrytí chromatogramů pro osm injekcí během jednoho dne a tabulka rel. retenčních časů pro různé dny potvrzují výjimečnou reprodukovatelnost.
Přínosy a praktické využití metody
Robustní podání gradientu výrazně minimalizuje odchylky retence, což je klíčové pro:
- Přesnou identifikaci a kvantifikaci peptidů
- Dlouhodobé monitorování kvality analytických běhů
- Metody vyžadující mělké a dlouhé gradienty
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se širší aplikace vysokotlakých binárních systémů v proteomice a biofarmaceutické kvalitě, integrace s automatizovanými přípravami vzorků a softwarovými nástroji pro prediktivní řízení gradientu a kontroly kvality v reálném čase.
Závěr
Volba chromatografického designu má zásadní vliv na spolehlivost a reprodukovatelnost LC metod. Vysokotlaké binární míchání poskytuje stabilní a konzistentní gradient pro náročné peptide mapping aplikace.
Reference
- Simeone J, Hong P Performance of the ACQUITY UPLC I-Class PLUS System for Methods which Employ Long, Shallow Gradients Waters Application Note 720006290EN May 2018
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Performance of the ACQUITY UPLC I-Class PLUS System for Methods which Employ Long, Shallow Gradients
2018|Waters|Technické články
[ APPLICATION NOTE ] Performance of the ACQUITY UPLC I-Class PLUS System for Methods which Employ Long, Shallow Gradients Jennifer Simeone, Paula Hong, and Patricia R. McConville Waters Corporation, Milford, MA, USA APPLICATION BENEFITS INTRODUCTION Repeatable retention time delivery One…
Klíčová slova
enolase, enolasemassprep, massprepuplc, uplcacquity, acquityplus, plusinjections, injectionsclass, classsystem, systemreproducible, reproduciblenote, noteapplication, applicationminutes, minutesperformance, performancedigestion, digestionover
Performance Comparison of Binary Ultra High Performance Liquid Chromatography Systems from Multiple Vendors for Methods Which Utilize Long, Shallow Gradients
2018|Waters|Technické články
[ APPLICATION NOTE ] Performance Comparison of Binary Ultra High Performance Liquid Chromatography Systems from Multiple Vendors for Methods Which Utilize Long, Shallow Gradients Jennifer Simeone, Paula Hong, and Patricia R. McConville Waters Corporation, Milford, MA, USA APPLICATION BENEFITS INTRODUCTION…
Klíčová slova
vendor, vendorbinary, binaryuplc, uplcacquity, acquityplus, plusminutes, minutesclass, classenolase, enolaseperformance, performancesystems, systemsmassprep, massprepsystem, systemultra, ultrawaters, waterscomparison
Demonstrating the Applicability of the ACQUITY™ Premier Binary System for Long Shallow Gradient Peptide Mapping Analysis
2022|Waters|Aplikace
Application Note Demonstrating the Applicability of the ACQUITY™ Premier Binary System for Long Shallow Gradient Peptide Mapping Analysis Corey E. Reed, Jennifer Simeone, Paula Hong Waters Corporation Abstract Reversed-Phase Liquid Chromatography (RPLC) is a key analytical tool in peptide mapping…
Klíčová slova
shallow, shallowbinary, binarypremier, premierpeptide, peptideacquity, acquitymapping, mappingapplicability, applicabilitydemonstrating, demonstratinglong, longgradient, gradientsystem, systemanalysis, analysiscompetitor, competitordeliver, deliverbiocompatible
EAS: Evaluation of Pump Performance for Long Shallow Gradient Peptide Mapping Analysis
2022|Waters|Postery
Evaluation of Pump Performance for Long Shallow Gradient Peptide Mapping Analysis Andrew Steere, Norris Wong, Paula Hong Waters Corporation, Milford, MA, 01757 RESULTS AND DISCUSSION INTRODUCTION Peptide mapping is a critical tool in biopharmaceutical analysis for characterization and impurity testing.…
Klíčová slova
arc, arcpremier, premierquaternary, quaternarybinary, binaryqsm, qsmmapping, mappingbsm, bsmsystems, systemspeptide, peptidedeviation, deviationcshtm, cshtmxselecttm, xselecttmnosie, nosieacross, acrossminutes
