Efficient and Clean Extraction of a Multi-Drug Panel with Oasis PRiME MCX for Clinical Research

Význam tématu

Mixed-mode SPE v klinickém výzkumu nabízí selektivní extrakci bazických analytů při současném odstraňování nežádoucích matricových složek, zejména fosfolipidů. Čisté extrakty z biologických vzorků jsou nezbytné pro vysoce citlivou kvantitativní analýzu LC-MS/MS.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo ověřit výkonnost nové sorbentové technologie Oasis PRiME MCX pro jednoduchou a čistou extrakci panelu více než 60 lékových analytů (opioidy, benzodiazepiny, stimulancia, antiepileptika, syntetické katinony). Výsledky byly porovnány s tradičním Oasis MCX a reverzními sorbenty Oasis PRiME HLB.

Použitá instrumentace

• Oasis PRiME MCX, Oasis MCX a Oasis PRiME HLB µElution Plates
• ACQUITY UPLC I-Class (FTN) s kolónou BEH C18 1,7 µm, 2,1×100 mm
• Xevo TQ-S micro Mass Spectrometer (ESI pozitivní, MRM)
• Software MassLynx v4.1 a TargetLynx XS

Použitá metodika

Vzorek: 100 µL lidské plazmy fortifikované pracovní směsí analytů (2, 10, 25 µg/mL).

• Oasis PRiME HLB: 3-krokový protokol (ředění amoniakem, praní 95:5 voda/MeOH, eluční směsi ACN:MeOH 90:10, 80:20, 50:50).
• Oasis MCX: 4-krokový protokol (ředění H₃PO₄, praní 2 % formiovou kyselinou a MeOH, eluční ACN:MeOH + 5 % NH₄OH).
• Oasis PRiME MCX 4-krok: ředění H₃PO₄, praní 100 mM NH₄CHO₂/2 % FA a MeOH, eluční ACN:MeOH + 5 % NH₄OH.
• Oasis PRiME MCX 3-krok: ředění 200 mM NH₄CHO₂/4 % H₃PO₄, praní MeOH, eluční ACN:MeOH + 5 % NH₄OH.
• LC-MS/MS: gradient 0,1 % FA v H₂O/ACN, 0–90 % B v 7 min, 0,6 mL/min, kolona 40 °C, ESI+ (desolv. 500 °C, 1000 L/h), MRM.

Hlavní výsledky a diskuse

Oasis PRiME HLB vykazoval snížené recoveries polárních bazických analytů (<20–50 %). Tradiční Oasis MCX dosáhl vysokých a reprodukovatelných recoveries (>80 %) při značné kontaminaci fosfolipidy. Oasis PRiME MCX udržel obdobné recoveries jako MCX a současně snížil zbytkové fosfolipidy o 95–98 % oproti běžnému MCX. Matrixové efekty u většiny látek nepřekročily ±20 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Jednodušší 3–4 krokové SPE bez kondicionace.
• Špičkovou čistotu extraktu díky účinnému odstraňování fosfolipidů.
• Vysoké recoveries bazických analytů a minimální matrixové efekty.
• Vhodnost pro klinickou farmakokinetickou a toxikologickou analýzu.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Nasazení ve vysoce propustných formátech 96-well.
• Adaptace pro další biologické matrice (moč, tkáně).
• Integrace s automatizovanými systémy přípravy vzorků.
• Vývoj multimodálních sorbentů pro širší spektrum analytů.

Závěr

Oasis PRiME MCX kombinuje jednoduchost protokolu s vynikajícími recoveries bazických lékových analytů a extrémně nízkou hladinou zbytkových fosfolipidů, což zvyšuje spolehlivost a citlivost LC-MS/MS analýz v klinickém výzkumu.

Reference

1. Chambers E. et al. Systematic and comprehensive strategy for reducing matrix effects in LC-MS/MS analyses. Journal of Chromatography B, 2007; 852(1–2):22–34.
2. Danaceau J.P., Chambers E. Analysis of plasma 17-hydroxyprogesterone, androstenedione and cortisol using Oasis PRiME HLB sorbent for UPLC-MS/MS. Waters Application Note, 2015.
3. Zhang X., Danaceau J.P. Improvements in recovery, reproducibility and matrix effects with Oasis PRiME HLB, a novel solid phase extraction sorbent. Waters Application Note, 2015.
4. Chemaxon. Chemicalize website, 2017.