LCMS
Další informace
WebinářeO násKontaktujte násPodmínky užití
LabRulez s.r.o. Všechna práva vyhrazena. Obsah dostupný pod licencí CC BY-SA 4.0 Uveďte původ-Zachovejte licenci.

XBridge Glycan BEH Amide, 130Å, 2.5 μm XP and 3.5 μm Columns and Standards

Manuály | 2017 | WatersInstrumentace
Spotřební materiál, LC kolony
Zaměření
Výrobce
Waters

Souhrn

Význam tématu


Hydrofilní interakční chromatografie (HILIC) na bázi amidu je klíčová pro detailní separaci značených oligosacharidů díky citlivé detekci a vysokému rozlišení. Analýza N-vázaných glykánů, např. z lidského IgG, umožňuje monitorovat kvalitu terapeutických bílkovin, sledovat glykanační profily v biotechnologii a klinické diagnostice. Použití stabilních hybridních částic BEH Technologie™ přináší vynikající chemickou a mechanickou stabilitu, klíčovou pro přesnou a reprodukovatelnou separaci komplexních glykanů.

Cíle a přehled studie / článku


Cílem manuálu je poskytnout návod k instalaci, stabilizaci, testování a dlouhodobému provozu sloupků Waters XBridge Glycan BEH Amide, 130 Å s částicemi 2,5 µm XP a 3,5 µm. Popisuje postupy přípravy kolon, rovnováhy mobilní fáze, stanovení účinnosti, funkční testování na testovacím standardu, čištění, regeneraci i skladování. Studie zahrnuje škálovatelné aplikace na UPLC i HPLC a troubleshooting běžných provozních problémů.

Použitá metodika a instrumentace


Metoda: gradientní HILIC separace 2-AB, 2-AA a RapiFluor-MS značených glykánů na sloupcích XBridge Glycan BEH Amide, 130 Å.
  • LC systém: ACQUITY UPLC H-Class Bio
  • Detektor: FLR Detector/2475 FLR (Ex 330 nm, Em 420 nm)
  • Kolony: XBridge Glycan BEH Amide 2,5 µm XP (2,1×150 mm) a 3,5 µm (2,1×150 mm)
  • Mobilní fáze A: 100 mM amonný formiát, pH 4,5; B: acetonitril
  • Teplota kolony: 60 °C, vzorků: 15 °C
  • Gradient: lineární 22→44,1 % A v ~56,6 min (0,34 mL/min)
  • Testovací standard: Waters 2-AB Glycan Performance Standard (p/n: 186006349)

Hlavní výsledky a diskuse


Standardní test na 2-AB značkovaném směsi N-vázaných glykánů lidského IgG prokázal rozlišení 14 hlavních komponent (G0, G0F, Man-5,… G2F+SA) s vysokou opakovatelností retenčních časů a konstantní účinností. Škálování na částice 1,7 µm, 2,5 µm a 3,5 µm ukázalo očekávané zkrácení analýzy s růstem backpressu a zachováním rozlišení. Změny účinnosti a retence byly systematicky měřeny pomocí teoretických pater (N) a hydrodynamického objemu glykánů vyjádřeného v glukózových jednotkách (GU).

Přínosy a praktické využití metody


Metoda umožňuje:
  • Detailní profilaci glykanačních variací biotechnologických produktů.
  • Monitorování kvality a stability terapeutických protilátek.
  • Vysokou reprodukovatelnost díky BEH Technologie™ a pevným analytickým protokolům.
  • Škálování od UPLC (rychlé analýzy) po konvenční HPLC pro různé typy pracovišť.

Budoucí trendy a možnosti využití


Následný rozvoj směřuje k:
  • Dalšímu zmenšování částic (<2 µm) za účelem zvýšení rozlišení a rychlosti.
  • Přímému spojení HILIC s hmotnostní spektrometrií pro pokročilé identifikace glykánů.
  • Automatizaci přípravy vzorků a datové analýzy pomocí strojového učení.
  • Vývoji nových derivatizačních značek s vyšší citlivostí pro kvantitativní glykomiku.

Závěr


Waters XBridge Glycan BEH Amide sloupky představují robustní a univerzální nástroj pro analýzu značených glykánů s vysokým rozlišením a reprodukovatelností. Při správném sestavení, equilibraci a čištění poskytují dlouhodobě stabilní výkon pro rutinní i výzkumné aplikace v biotechnologiích a klinické analytice.

Reference


  • Waters Corporation. XBridge Glycan BEH Amide Care and Use Manual, Rev H 720004882EN, 2017.
  • Neue, U.D. HPLC Columns: Theory, Technology, and Practice. Wiley-VCH, 1997.
  • Waters Corporation. HPLC Troubleshooting Guide, literature code 720000181EN.

Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.

PDF verze ke stažení a čtení
 

Podobná PDF

Toggle
Amide-Bonded BEH HILIC Columns for High Resolution,  HPLC-Compatible Separations of N-Glycans
Amide-Bonded BEH HILIC Columns for High Resolution, HPLC-Compatible Separations of N-Glycans Matthew A. Lauber, Stephan M. Koza, Jonathan E. Turner, Pamela C. Iraneta, and Kenneth J Fountain Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I…
Klíčová slova
glycan, glycanuplc, uplcbeh, behalliance, allianceacquity, acquityhplc, hplcbio, biomin, minladder, ladderparticle, particleseparations, separationsprofiles, profilesclass, classglycans, glycansnibrt
GlycoWorks Sample Preparation Consumables
GlycoWorks Sample Preparation Consumables Glycosylation is one of the most common forms of post-translational modification (PTM) of human and other eukaryotic proteins. Glycosylated proteins (glycoproteins) make up 50–70% of human proteins. Consequently, glycans play a critical role in a myriad…
Klíčová slova
glycan, glycanglycoworks, glycoworksbeh, behxbridge, xbridgeglycans, glycansflr, flruplc, uplchilic, hilicmanose, manosecolumn, columnkit, kitrapigest, rapigestfluorescence, fluorescencestandard, standardacetylglucosamine
Transferring RapiFluor-MS Labeled N-Glycan HILIC Separations Between UPLC and HPLC
Transferring Rapi Fluor-MS Labeled N-Glycan HILIC Separations Between UPLC and HPLC Stephan M Koza, Matthew A Lauber, and Kenneth J Fountain Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B E N E…
Klíčová slova
uplc, uplcglycan, glycanrapi, rapihplc, hplcrapifluor, rapifluorfluor, fluorlabeled, labeledhilic, hilicseparations, separationstransferring, transferringglycans, glycanscomparability, comparabilitybetween, betweenacquity, acquityalliance
Chromatography Columns and Supplies Catalog
2023–2024 Chromatography Columns and Supplies Catalog Table of Contents Sample Preparation 51 Sample Vials and Accessories 83 How to Choose a Column 93 MaxPeak Premier Columns 105 Sub-2-µm UPLC Columns 129 2.× µm UHPLC Columns 179 ≥3 µm Analytical HPLC…
Klíčová slova
obd, obddimension, dimensioncolumn, columncolumns, columnscartridge, cartridgeguard, guardoasis, oasiskit, kitacquity, acquitypak, pakdescription, descriptionuplc, uplcordering, orderingpreparative, preparativespherical
Další projekty
GCMS
ICPMS
Sledujte nás
FacebookX (Twitter)LinkedInYouTube
Další informace
WebinářeO násKontaktujte násPodmínky užití
LabRulez s.r.o. Všechna práva vyhrazena. Obsah dostupný pod licencí CC BY-SA 4.0 Uveďte původ-Zachovejte licenci.